LC-MS%2fMS导向、前体定向方法合成新型Sansanmycin类似物研究的论文.pdfVIP

LC-MS/MS 导向、前体定向方法合成新型 Sansanmycin 类似物研究 1 蔡强 ，王林林，任浩，张许萌，陈汝贤，解云英* （中国医学科学院医药生物技术研究所 北京 100050 ） Sansanmycin （SS ）是一组尿苷肽类抗生素，由我国贵州土壤中发现的链霉 菌 Streptomyces sp. SS 所产生。尿苷肽类抗生素作用机制新颖，通过抑制细胞壁 合成过程中的关键酶尿苷肽类磷酸（UDP ）-N- 乙酰胞壁酸-五肽转位酶（MraY 转位酶）而抑制细胞壁的合成。目前，临床上尚未有在用的 UDP-N- 乙酰胞壁酸 -五肽转位酶抑制剂，因此它与现用的药物不会产生交叉耐药。 尿苷肽类抗生素是一类具有相同母核结构的MraY转位酶抑制剂，且具有抗 菌谱窄，几乎只对铜绿假单胞菌和结核分支杆菌具有抑制活性的特点，从而可能 成为寻找新型的低毒、窄谱抗菌药物的候选化合物或先导化合物的最佳选择之 一。此类抗生素还包括pacidamycin, napsamycin和mureidomycin等。为了寻找新 型的尿苷肽类似物，我们运用LC-MS 的方法对链霉菌Streptomyces sp SS的发酵液 + 进行分析，发现发酵液中含有一个分子离子峰为 848 （m/z 848 ）[M+H] 的 Sansanmycin类似物，根据MS/MS数据推测其N-末端为苯丙氨酸，而非此类化合 物常见的间酪氨酸，将其命名为Sansanmycin A-1。为积累此化合物，我们在发酵 时加入苯丙氨酸前体，以提高目标化合物的产量。之后，通过大孔吸附树脂、离 子交换树脂及制备液相等方法分离纯化，在获得目标化合物的同时，我们还获得 了一系列Sansanmycins类化合物，分别命名为Sansanmycin A-2，A-3 ，A-4 ，A-5 和 A-6 。其中，Sansanmycin A-1 和A-4 为不加前体也能产生的次级代谢产物， Sansanmycin A-2，A-3 ，A-5 和A-6 是加苯丙氨酸前体后产生的次级代谢产物。 通过ESI-MS/MS 、NMR等确定了其结构，发现其假四肽中一个或两个氨基酸为 前体苯丙氨酸。 对 Sansanmycin A-1，A-2 ，A-3 和 A-4 的抗菌谱研究结果显示，抗菌谱很窄， 主要对铜绿假单胞菌有抑菌作用，分别为 32，4 ，32 和 16μg/ml ，其中 Sansanmycin A-1 和 A-2 对耻垢杆菌有较强的抑制作用，为 4μg/ml 。此外，抗结核分枝杆菌活 性结果显示 Sansanmycin A-1 为 16μg/ml，A-4 为 8μg/ml 。 该项研究通过 LC-MS/MS 分析的导向作用鉴定了发酵液中一个含有苯丙氨 酸的微量组分，并在发酵过程中定向加入苯丙氨酸前体，不但增加了目的代谢物 的产量，同时产生了一系列新的类似物，该研究还初步揭示了 Sansanmycins 生 物合成中NRPSs的腺苷酰化结构域对苯丙氨酸的活性影响，对进一步发现新型的 尿苷肽类抗生素具有指导作用。 *通讯作者：解云英，xyying102@163.com