n-3多不饱和脂肪酸对肥胖小鼠瘦素基因启动子区DNA甲基化的影响.pdfVIP

中围儿童保健杂志 2014年 O4月第 22滏第 4期 CJCHCAPR．2014，V()122．No．4 375 · 基础科研论著 · n一3多不饱和脂肪酸对肥胖小鼠瘦素基因启动子区DNA甲基化的影响 王翠 ，中文雯，樊超男，夏露露，董华 ，路媛媛，齐可民 首都医科大学附属北京儿童医院 北京市儿科研 究所营养 中心 ，北京 100045 摘 要 ： 目的 从基因启动子区 DNA 甲基化环节 ，探讨 n3多不饱和脂肪酸 (n一3po1yunsaturatedfattyacids，n_3 PUFAs)对肥胖状态下瘦素表达的表观遗传调控机制。方法 3～4周龄C57BI／6J雄性小 鼠3O只，随机被分为3组 (每组 1o只)，分别给予高脂饲料、鱼油 n一3PUFAs高脂饲料 (脂肪含量均为 34．9 ，供能比为 4o )以及正常脂饲料(脂肪含量 为 4．3 ，供能比为 10 )喂养 4个月以诱导肥胖 。喂养结束时取性腺周同脂肪组织，应用 RT—PCR检测脂肪组织瘦素 mRNA水平 ；应用亚硫酸盐修饰直接测序 (bisulfitesequencing—PCR，BSP)法检测瘦素基 因启动予区 CpG 甲基化程度 ；应 用染色质免疫共沉淀一荧光定量 PCR(CHIP—RTPCR)技术测定瘦素基因启动子 区结合 的DNA 甲基化转移酶 (DNMTs)、 甲基化 CpG结合蛋 2(MECP一2)以及 RNA聚合酶 2(PolyII)的变化 。结果 与正常脂饲料组小 鼠相 比，脂肪组织中瘦 素 mRNA表达在高脂饲料诱导肥胖小鼠明 增加 ，而在鱼油高脂饲料组肥胖小 鼠无变化 。基 因启动子区甲基化结果显 示 ，高脂肥胖小 鼠瘦素基因启动子 区CpG位点 甲基化程度 、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和 MECP一2含量均较正常饲料 组显著升高，并伴随PolyII含量减少 ；而鱼油高脂饲料组瘦素基 因启动子区结合 DNMT3a、DNMT3bandMeCP一2增加 ， 但肩动子区MECP一2含量与高脂饲料组比缺有显著降低 ，DNMT1和 PolyII以及 CpG位点甲基化程度无改变 。结论 肥 胖状态下瘦素表达变化可能与基因启动子区 DNA 甲基化 以及结合 的相关调控 蛋 白、RNA聚合酶等有关 ；n3PUFAs对 瘦素基因表达的调节也可能是通过对这些蛋 白的影响而实现的。 关键词 ： n一3多不饱和脂肪酸 ；肥胖 ；DNA甲基化 ；DNA 甲基化转移酶 ；甲基化 CpG结合蛋白 中图分类号：q95-33 文献标识码：A 文章编号 2014)04—037504 doi：10．11852／zgetbjzz201422—04—12 Effectofn-3p0lyunsaturatedfattyonDNA methylation oftheleptinpromoterin obesemice．WANG Cui，SH EN Wen—wen， FANChao—Hall，XIA Lu—lu，DONG Hua，LU Yuan—yuan，QIKe—min．(ClinicalNutritionCenter，BeijingPediatricRe— searchInstitute，BeijingChildrensHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100045，China) Corr 0d行gaythor：Q，Ke一，”in。E-mail：qkm732@ ohu．corn Abstract： Obejective Toinvestigatetheepigeneticmechanismslinkingn一3polyunsaturatedfattyacids(n一3PUFAs) andtheincreasedleptinexpressioninobesity． Methods Thirty3～4week—oldmaleC57BI／6Jmicewererandomlydivid— edinto3groupsandfed4monthswithtwodifferenthighfatdiets(34．9 offatproviding