5种中草药多糖的提取与对嗜水气单胞菌体外抑菌研究.pdfVIP

◎；o嗍J器 5种中草药多糖的提取及对嗜水气单胞茵 体外抑菌研究 于翠平赵红月 (河南工业大学生物工程学院，郑州450001) 摘要：本实验采用生物活性成分提取方法中的水煮醇提法和微波辅助提取法分别对大黄、黄连、黄芪、当归和丁香5种中草药进行多 糖提取，并各自配制成10-2g／mL、10-3 g／mL和10-4g／mL三种不同浓度的多糖提取液，分别对嗜水气单胞菌做体外抑菌实验。实验结 果表明：两种提取方法的多糖提取率高低水平不同。其中，水煮醇提法对这五种中草药的多糖提取率为5．0％一9．O％，微波辅助法的多糖 提取率为5．9％～6．7％。五种中草药提取得到的多糖对嗜水气单胞菌体外均有抑菌效果，其中丁香多糖的体外抑菌效果最为显著。不同浓 度中草药多糖溶液对嗜水气单胞菌的抑菌效果均随多糖浓度的升高而增强。 关键词：中草药多糖；嗜水气单胞菌；水煮醇提法；微波辅助法 近年来，水产动物疾病日益严重．其中嗜水气单胞菌病是鱼类最常见的细菌性疾病，引发该疾病的病原菌是嗜水气单胞菌。嗜水气单 胞菌(Aeromonas hydrophila，Ah)，是弧菌科、气单胞菌属中的嗜温有动力的单胞菌，革兰氏阴性短杆菌。其普遍存在于淡水、污水、淤 泥等各种水体中，是一种典型的人、畜、鱼类共患病病原菌【’}。该菌在生长繁殖过程中会产生肠毒素、细胞毒素、溶血性外毒素、蛋白酶 等多种外毒素，可引起养殖鱼类全身性出血败血症、腐皮病。人体感染后会出现外伤感染、急性胃肠炎和败血症等症状。目前，防治此类 细菌性疾病常用的药物是抗生素，但长期使用抗生素不仅污染水体，造成鱼体伤害，降低鱼类免疫力，还会产生耐药菌株，使病害更加难 以控制，而且抗生素残留在鱼体中，通过食物链壹接影响到食品安全和人类的自身健康。 中草药多糖是存在于中草药中的一种免疫增强剂，能够增强动物的非特异性免疫功能，提高机体的抗病能力口。】。与抗生素和合成抗 菌药相比，中草药还具有少残留、无污染、不产生抗药性病原菌等优点[4-5]o大量研究[6—9】表明中草药对致病菌具有较好的抑制作用， 但具体的抑菌成分和抑菌机制研究报道尚还较少。 本实验用水煮醇提法和微波辅助提取法分别提取大黄、黄连、黄芪、当归和丁香五种中草药中的多糖成分，并将上述五种多糖提取液 分别配制成10-29／mL、10-39／mL和10-49／mL三种不同浓度的稀释液，再对嗜水气单胞菌做体外抑菌实验。 1材料与方法 1。1实验材料 嗜水气单胞菌菌种为中国科学院水生生物研究所保藏菌种，细菌号：BYK一038。 牛肉膏蛋白胨培养基：蛋白胨109，牛肉膏39，氯化钠59，琼脂209，水1000ml，试剂均为分析纯。 实验用5种中草药：大黄、黄芪、黄连、当归、丁香，市购。 2013：裟；嚣淼呈潞：嵩：器 1．2实验方法 1_2．1水煮醇提法提取中草药多糖 mL，摇匀，分 水煮醇提取法提取5种中草药多糖参考赵海燕等，略作修改。称取4份各10g粉碎后的中草药原料，各加蒸馏水100 r／min离心10rain，取上 别于100。C水浴加热60min，取出冷却，过滤，收集滤液，滤渣再经如上操作，反复多次，合并滤液，经2500 清液。加98％的乙醇将滤液浓缩至浓度为80％，搅拌，静置，用真空抽滤泵抽滤，用乙醇或丙酮洗涤2次进行沉淀，放置在干燥箱中干燥， 即得中草药多糖粗提品，称重。【14 1-22微波辅助法提取中草药多糖 微波辅助法提取大黄多糖参考张佳兰，略作修改。称取4份各l mL，加入氢氧化钠调制pH值为8．5， Og粉碎后大黄，各加蒸馏水400 摇匀，调微波功率为400W浸提10min，离心取上清液。滤液浓缩，加98％的乙醇至浓度为80％，搅拌，静置，用真空抽滤泵抽滤，沉 淀用乙醇或丙酮洗涤2次，放置在干燥容器中干燥，即得大黄多糖粗提品，