稻瘟病菌中一个新的控制分生孢子形态并影响其致病力的基因研究.pdfVIP

分F生物学 稻瘟病菌中一个新的控制分生孢子形态并影响其致 病力的基因的研究 ofaNovelGeneResultedin Disruption Conidialand Shape Attenuated in PathogenicityMagnaporthegrisea 赵晓燕，魏士平，彭友良 (中国农业大学植物病理学系，北京100094) grisea)的分生孢子呈梨形，由三个细胞组成，是该菌侵染 稻瘟病菌(麒agnaporthe 水稻的主要初侵染源和再侵染源。虽然有关稻瘟病菌致病性的分子机理报道很多，但是， 有关该菌分生孢子的形态建成在致病性中的作用还很不清楚。作者通过插入突变途径，从 稻瘟病菌中克隆了一个参与分生孢子形态建成的新基因，并研究了该基因在稻瘟病菌致病 性中的作用。 通过筛选稻瘟菌的REMI转化体库，作者分离获得了三个分生孢子形态异常的稻瘟菌突 um， 变体X54，H3035和H3587。这三个突变体具有相似的分生孢子形态突变表型：宽度约8 u 长度约29m；与野生型相比，它们的分生孢子宽度上较窄，长度上较长。遗传杂交分析表 明，这三个突变体的这种突变表型与插入标记潮霉素抗性基因是共分离的，即表型的突变 是由于REMI转化中质粒的插入引起的。通过X54与野生型在洋葱内表皮的侵入实验表明： 突变体X54在洋葱内表皮上形成侵染钉的比率约为野生型的86．5％．形成侵染性菌丝的比 率约为野生型的56．9％；在水稻叶片上三个突变体形成病斑数比野生型的少，尤其是扩展 基因组Southern杂交表明：在突变体X54中，质粒的插入是单位点单拷贝的：在突变 体H3035和H3587中，质粒均为两个位点多拷贝插入，并且有一个位点是共同的，即引起 表型突变的位点。通过质粒拯救，我们获得了突变体X54和H3035中引起表型突变的质粒 插入位点的基因组侧端序列。对稻瘟菌基因组数据库中相应重叠群的序列进行的比较分析 表明：这两个插入位点位于同～个推定的基因中，砖个插入位点之间相距大约2kb：其中 X54中的插入位点位于两个预测的外显子之间，H3035中的插入位点位于最后～个外显子内。 BLAST结果表明：这个基因可能编码的蛋白质的氨基酸序列与粗糙脉孢霉的一个预测蛋白有 25％的一致性，为生化功能未知蛋白，并将该基因命名为COMl。 为证明该基因的作用，作者分别对突变体和野生型菌株进行了基因互补实验和基因敲 除实验。将包含基因全长序列的DNA片段和选择标记新霉素抗性基因连到载体上后分别互 补三个突变体，所获得的转化体在分生孢子的形状和致病力上均与野生型一致。用潮霉素 抗性基因代替目标基因转化野生型菌，所获得的基因敲除体在分生孢子的形状上与三个插 中国植物病理学会2004年学术年会论文集 入突变体完全一致；在致病力方面，与H3035和H3587相似，在水稻叶片上形成病斑数显 著减少，尤其是感病病斑形成能力显著变弱，只有野生型的2．5％：在洋葱内表皮L形成侵 染钉的比率约为野生型的33．7％，形成侵染性菌丝的比率约为野生型的16．i％。 根据上述结果，作者认为：COldl不仅是控制稻瘟菌分生孢子的形态的…个重要基因， 同时也是该茵高效率侵染植物的重要致病力因子。为了进～步揭示COMI的作用机理，作者 正在进行其亚细胞定位与表达动态的分析。 M01ecularandCharacterizationa C10ning of the l ProteinKinaseGenefrom