副猪嗜血杆菌的分离鉴定和药敏试验.pdfVIP

动物医学进展。2011，32(8)：115一118 in Medicine Progress Veterinary 副猪嗜血杆菌的分离鉴定和药敏试验 李俐睿1，王 印1’2’，宋 勇1，钟 霏1，黄海燕1 (1．四川农业大学动物医学院．四川雅安625014；2．动物疫病与人类健康I匹lJll省重点实验室．四川雅安625014) 摘要：采用细茵学检测方法和PCR技术对来自四川省遂宁市某规模化养猪场疑似副猪嗜血杆茵 S 色及培养特性检测、生化试验、血清型试验16 rDNA序列分析，鉴定为4型HPS。动物致病性试验显示 HPS分离株均具有较强致病性，药敏试验表明HPS分离株具有较强的耐药性，仅对阿米卡星、氨苄舒巴坦、 复达欣、痢特灵敏感。 关键词：副猪嗜血杆茵；生化；鉴定；PCR；血清学试验；药敏试验 中图分类号：S852．612 文献标识码：A 副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis，HPS) 1材料与方法 属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属成员，被认为是革拉泽 1．1材料 氏病(Glaesser’sDisease)的主要病原[1]。本菌可使 1．1．1病料病死猪的胸水，关节积液，并采集肺 2周龄到4月龄的猪感染发病，尤其5周龄～8周龄 脏、心脏等病料分离病菌。 断奶前后和保育阶段的猪比较常见，发病率10％～ 1．1．2主要试剂与弓l物胰蛋白大豆琼脂TSA， 15％，病死率可达50％。发病猪表现高热、咳嗽，呼 胰蛋白胨，酵母提取物，微量生化试管和药敏纸片， 吸困难、消瘦、关节肿胀、跛行和被毛粗乱；剖检可见 多发性浆膜炎、胸膜炎、心肌炎、腹膜炎、关节炎和脑 购自杭州微生物试剂有限公司；新生牛血清，NAD， 膜炎等病理变化。此外，副猪嗜血杆菌还可引起败 购自成都科比特生物技术有限公司；Tap聚合酶等 血症，在不出现典型的浆膜炎时就呈现发绀、皮下水 相关试剂，购自博万德生物有限公司；副猪嗜血杆 肿和肺水肿病理变化，甚至死亡。研究表明，该病常 菌标准血清试剂盒，由中国农科院兰州兽医研究所 与猪流感病毒混合感染，同时在猪繁殖与呼吸综合 症病毒等病原感染造成的免疫抑制常加重感染发 S 的16 rRNA基因序列，使用引物设计软件Prim- 病，带来重大经济损失，严重威胁着全世界养猪产业 er5．0设计l对检测引物(扩增长度约791 bp)，P1： 的健康发展，因此也成为近年来研究较多的一种重 5’一AGAATTCCACGTGTAGC一37，P2：5-TATA— 要的猪的病原菌。在我国很多地区也时常存在该病 的流行和发生[2-朝，2010年6月～9月四川省遂宁市 服务有限公司合成。按说明书稀释后一20℃保存 某规模化养猪场2月龄小猪出现HPS感染疑似症 备用。 状，并出现死亡病例。本研究采用常规实验室诊断 1．1．3培养基的制备TSB培养液、TSA平板参 方法通过细菌分离、染色镜检、培养特性、生化试验、 照文献D7的方法制备，NAD和血清平板分别按照 血清型试验、16SrDNA序列分析、动物致病性试验