靶向毒素DTVEGF的构建表达与活性分析.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ! %’ (! ) (! 年 月 !# $ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+,-. !# !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 靶向毒素!#$%’ 的构建、表达与活性分析 柴映爽 程 新 姚立红 陈爱! 喻 宏 严馨蕊 贾润清 黄国锦 张智清 （中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 病毒基因工程国家重点实验室 北京 19! ） 摘 要 肿瘤的快速生长依赖于新生血管的形成。血管内皮生长因子（ ）是血管发生和形成过程中的主要介 %:F6 质，其特异性受体在正常组织和肿瘤组织的表达率存在数个数量级的差异，因此可以将毒素分子转运至增生的肿 瘤上皮组织中抑制肿瘤血管增生，从而抑制肿瘤的生长。将白喉毒素的前$02 个氨基酸基因片段与%:F6189 通过 一短肽相连构建为融合蛋白基因，在大肠杆菌中表达，获得纯化蛋白。实验证实该融合蛋白对血管内皮细胞有特 异性杀伤作用，并研究了其对鸡胚尿囊膜新生血管的抑制作用。 关键词 靶向毒素，血管内皮生长因子，白喉毒素，融合蛋白 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） GH08 I 1/$81 !# !/12!/9 在肿瘤的治疗药物中，以 受体为靶向的 自 ，质粒 、 、菌种 本 %:F6 L,;4?+ BF:*/$V6 BJ%!! PW/9! 融合毒素正受到越来越多的关注。其生物学基础来 室保存。 ［］ 1 细胞和鸡胚： 和 细胞本室保存。 自肿瘤组织与正常组织新生血管增生率的差异 。 () ()* WR%:S X2!2 %:F6 在肿瘤生长和转移中是一种重要的介质，在 三日龄鸡胚购自北京西郊养鸡场。 工具酶与生化试剂：核酸内切酶购自 ， 血管的发生和形成过程中起主要调节作用。122$ () ()+ 3+O+Q+ 聚合酶购自 ， 连接酶购自 年J,K 等和 L’+E4 等运用原位杂交表明其特异性 BMC P)I YZE,?4 3# P)I 受体 M’E/1 和 M’N/15 OPQ 在肿瘤血管表面高度表达， L,;4?+，核酸分子量标准购自3+O+Q+，蛋白质分子 而相邻正常组织的血管上皮细胞中%:F6 的受体几 量标准购自[?;+ 和 FD-，兔抗人%:F6 多抗购自 乎无法检测出，因此%:F6 可以用来将毒素多肽转 [+E+ S,C= 公司，马抗白喉毒素血清购自中国药品生