蛋白质组学研究中质谱技术.pdfVIP

蛋舷组学研究中的质谱技术 刘骁勇韩金祥 (山东省医药生物技术研究中心，卫生部生物技术药物重点实验室济南250062 【摘要】随着科学的不断发展，蛋白质组学以其高通量等优势，为我们探寻基因功能的奥秘 提供了一种新的思路和研究手段。质谱技术已成为蛋白质组学的核心技术之一。本文简要综 述了肽和蛋白质等生物大分子质谱分析的原理、方式和应用，并对其发展前景作出展望。 【关键词】蛋白质组学；生物质谱；蛋白质鉴定 1．概述 蛋白质组(proteome)是指一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质，最初是 体水平研究蛋白质的组成及其动态变化规律，从而深入认识有机体的各种生理和病理过程。 蛋白质组学集中于动态描述基因调节，对基因表达的蛋白质水平进行定量的测定，鉴定疾病、 药物对生命过程的影响，以及解释基因表达调控的机制。随着研究的逐步深入，蛋白质组学 在探讨疾病的发生机制、诊断防治以及设计药物分子靶标等方面取得了一系列突破，被认为 是跨越基因组与临床应用之间鸿沟的桥梁【”。 蛋白质组学研究对技术的依赖性和要求远远超过基因组学。蛋白质组学研究技术平台 主要由三类技术组成：蛋白质组的分离技术、蛋白质组的鉴定技术和生物信息学等数据处理 技术。 尽管在蛋白质组分分离技术方面存在着多种方法并存的局面，但质谱(mass spectrometry，MS)技术具有灵敏度和准确度高，自动化程度好等特点，能准确地测量肽和 蛋白质的相对分子质量、氨基酸序列及翻译后的修饰，因此无可争议的成为连接蛋白质与基 因的重要技术，开启了犬规模自动化的蛋白质鉴定之门。 2．生物质谱技术 传统有机质谱仅用于小分子挥发物质的分析，由于新的离子化技术的出现，如基质辅助 laser ionization-timeof 激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted desorption flight-mass spectrometry， ESI．MS)等，各种新质谱技术开始用于生物大分子的分析。质谱法已成为研究生物大分子 特别是蛋白质研究的主要支撑技术之一，在对蛋白质结构分析的研究中占据了重要地位【2】o 质谱法分析蛋白质的原理是通过电离源将蛋白质分子转化为离子，然后利用质谱分折仪 的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(m／e)的蛋白质离子分离开来，经过离子检测器收 集分离的离子，确定离子的m／e比，分析鉴定未知蛋白质。质谱分析用于蛋白质等生物活性 分子的研究具有如J卜优点：很高的灵敏度能为亚微克级试样提供信息，能最有效地与色谱联 用，适用于复杂体系中痕量物质的鉴定或结构测定，同时具有准确性、易操作性、快速性及 很好的普适性。 2．1MALDI_ToF-MS与ESI．MS[34I 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI．TOF．MS)利用基质吸收激光的能量将 mass 固相的多肽样品转换成离子信号t获得蛋白质的肽质量指纹图谱(peptidefingerprint， PMF)，然后与数据库中理论肽质量相配比来鉴定蛋白质。 其详细原理，待检样品与含有在特定波长下吸光的发光团的化学基质(matrix)混合，此 样品混台物随即滴于一平板或载玻片上进行挥发，样品混合物残余水份和溶剂的挥发使样品 整合于格状晶体中，样品然后置于激光离子发生器(1asersource)。激光作用于样品混合物， 使化学基质吸收光子而被激活。此激活产生的能量作用于多肽，使之由固态样品混合物变成 气态。由于多肽分子倾向下吸收单一光子，故多肽离子带单一电荷．这些形成的多肽离子直 接进入飞行时间质景分析仪(TOFmass analyzeO。飞行时间质量分析仪用于测量多肽离子由 分析仪的一端飞抵另～端探测器所需要的时间。而此飞行时间同多肽离子的质量／电荷的比 值成反比，即质量／电荷之比越高，飞行时间越短。最后，由电脑软件将探测器录得的多肽 质量，电荷比值同数据库中不同蛋白经蛋白酶消化后所形成的特定多肽的质量／电荷比值进 行比较，以鉴定该多肽