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病毒潜伏基因和癌基因；天特植巍挠癌新靶点的研究257 病毒潜伏基因和癌基因：天然植物抗癌新靶点的研究 陈剑经陈穗峰’r益新Raab—TraubN张锋邝珠玑 黄玫玲f慧馨张晓实陈炜黄平叶燕丽谷丽 寻找抗癌新靶点，对有害基因及其表达过程的控制，是当前基础肿瘤学中的一个崭新的研 究思路。针对靶基因抗癌作用的特色是从基因水平有选择地去控制、关闭或阻断基因靶标，从 而达到抗癌的效应。近年来，基因控制策略已由泛指的攻击瘤细胞DNA合成与表达的作用， 到深人研究天然产物(植物等)调控癌细胞内有害基因的表达；并由癌基因靶…拓展到病毒基 因靶“J，因此，在防治肿瘤机制研究中更加有针对性。 要作用o“]。能否通过抑阻隐伏在人体内有害的病毒基因和突变的癌基因，寻找新的抗癌植 物药物，目前尚待探索。本文着重探讨景天科植物是否有选择地修饰或阻断隐匿在人机体细 胞内EBV潜伏性膜蛋白基因(1a咖I gene，IMP)和c一Ⅱ卵癌基因，为天然植物 membranepmtem 阻抑癌细胞靶基因寻找抗癌药物提供依据。 材料和方法 I一)细胞系 周血淋巴细胞，经体外自发性转化而建立的细胞系。经测序证实c1936具有中国南方EBV广 州亚株的nlP序列。 胞，携带EBV—LMP基因。 3．HL一60细胞系人早粒白血病细胞成株，本室保存。 以上三个细胞系的癌基因C—myc均过度扩增，前两株携带Ⅱjv病毒潜伏性膜蛋白基因 (LMP)。 (二)天然植物 在细胞培养过程中，设立对照组和实验组，后者在培养液中加入干扰细胞的因子为天然植 物玉海棠(‰lmdmFlamnm，KF)，属景天科植物(提取化学有效成分另报道)。 (三)诱导细胞凝集试验 1．诱导凝集因子在上述细胞培养中，转化细胞或瘤细胞在体外悬浮生长过程中，可出现 国家重点基础研究项目。973”计划，国家自然科学基金、广东省医学科学“五个一工程”重点项目 作者单位：510060广州，中山医科大学肿瘤中心(陈剑经曾益新张峰邝珠玑黄玫玲曾慧馨张晓 —TnmbN) 中罾癌盎研究迸晨@ 自然凝集现象，此种细胞膜表型当加入生物素(d—Biotin，GoHMN2qS，Sigma，100 pg／ml终浓 度)时，可诱导明显的细胞悬浮集落的凝集团块(诱导凝集)n-。 2．细胞悬浮集落的观测该技术由本实验建立004】，观测细胞体外培养中悬浮生长状态， 转化细胞呈自发性或诱发性凝集的集落形成，为其重要生长特性。 应用缩时相差显微摄影仪(tim lap∞pIIa∞一omalm％t 胞观测。将整瓶细胞安放人该仪的小温室内，用相差显微镜作活细胞观察。方法：在该仪底座 的测量视野三重方格内，实验24 h后描图。一般凝集团块呈不整圆形。用显微尺量出不整圆 形之最长半径(R)和最短半径(h)，代入公式求得体积参数。 1 体积参数=曲(R一{h)，*为圆周率=3．1416 J (四)细胞生长抑制试验 对照组各设10瓶，振荡使细胞混悬和分散。每瓶细胞数2xl舻，nIl，第2天起计数，台盼蓝计算 N为实验组细胞培养N天后的活细胞数，Nn为对照组细胞实验的N天后活细胞数。 《五)肿试验 96孔培养板中，并设立一排空白对照孔，37。c，5％二氧化碳培养24h，加入0．5％MTT溶液 nm、630 10mZn，再静止20mln，继续培养4h后放置傲孔板在酶标比色仪上，选用570 nm波长， 测定光吸收度(A值)，获得平均OD代表细胞系生长活性。 in (六)反义原位示踪系统(锄出∞跎缸岫壤systemdm，ATSIS)