产酯酶微生物菌种筛选研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨话套论文集 产酯酶微生物菌种的筛选研究 鄢洪德，汪钊‘ 孝光伟 ({圻江工业大学生物与环境工程学院，杭州310014) 摘耍：研究了产酯酶微生物的筛选，包括筛选模型、酶活力柱测方法及苗株的分布。对30 多份土样以及实验室保存的苗种进行了大量的筛选，以添加三醋酸甘油酯、乳酸乙哺蓿类曲质 对土样等样品富集，采用潺加显色剂澳甲酚紫的快速简便早板曼色法，观察水解堑色圈直径和 苗落直径的大小进行初筛。获得两者直径之比相对较大的菌株174株，呆用平板打孔检测法 和摇瓶发酵比色洼测酶活力相结合进行复缔，最终得到睹薄活力较高的24株菌株。就初筛和 复筇方法及缮果加以比较分析，对复筛菌株做不同底物的酶活力检测，建立了一个有效、筒便 及快速的微生物酯癣的谛选模型。井对酯酶产生苗的立体选择专一性进行了卸步比较。 关键词：哺酶；脂肪酶}菌种筛选 品等行业，如不对称合成、酯合成、酯交换、多肽合成等催化反应中o。5]。产脂肪酶微生物 菌种的筛选研究报道较多，如邬敏辰“】、陶文沂r”、王簧英[B]，金其荣伽等利用油脂为唯一 游离酸来确定酶活性的大小；还有利用生色底物或产脂肪酶微生物的某些特性，如 Yeoh口”采用不同的生色底物如对硝基苯辛酸酯、对硝基苯豆寇酸酯及对硝基苯棕榈酸 酯而筛选到对不同碳链长的脂肪酸具有专一性的产脂肪酶微生物；李祖义[1”利用显色剂 Rhodamine B和一定浓度橄榄油的平板筛选法。产酯酶微生物的筛选也有一些研究，如 Guillermo等研究者利用一种新的透明圈变色法来筛选酯酶产生菌o“，结果比传统的筛 选法有更清晰和明确的变色透明圈。与产脂肪酶菌种的筛选研究相比产酯酶微生物的 筛选报导较少。本文研究了产酯酶微生物的筛选，包括筛选模型，酶活力检测方法以及 菌株的分布情况。 1材料与方法 1．1±样及菌种来源 筛选样品来源于酒厂，内酯化工厂、乳品厂、油脂厂、肉联厂、食堂等长期与酯类及油 脂接触的土壤和污油水样，还包括实验室所保存的菌种。 1．2菌种初筛 1．2．1细菌培养基制备 作者简介：鄢洪德(t980～)，男，助理实验师．E—man#yanhongdel980@126．com *通讯作者：Tel／Fax：86—571-E—m越：‰蛆g出∞@163．∞m 第四次全国发酵工程学术讨论会 SO‘·7H201．0IFeSol·7H200．01；NaCl L，经细菌过滤器除菌后加人，下同)。 2)初筛平板培养基(g／L)牛肉膏20．0；K2HPOt 7H201．0；NaCl0．5；FeSq·7H20 1MPa灭菌20min后加入三醋酸甘油酯30．0(mL／L)。 5．0；琼脂18．0；pH7．0；o． 3)肉汤斜面培养基(g／L)牛肉膏3．0；蛋白胨10．0，NaCI 1MPa灭菌20rain。 1．2．2霉菌培养基 1)富集培养基(g／L)酵母膏20．0；葡萄糖20．0；K2HPOt2．0；MgSO．·7H200．5； FeSol·7H：0 L)。 08MPa灭菌20rain后加入三醋酸甘油酯30．O(mL／L)。 08MPa灭菌20min。 1．2．3初筛方法 1)富集方法取土壤样品1克或污油水样2mL加人装有25mL富集培养基的250 h， mL三角瓶中，在32℃下，150r／rain摇瓶发酵培养。筛选细菌富集48h，霉菌富集96 再移取5mL培养液至另一盛有富集培养基的三角瓶中继续培养。如此重复3次．然后 进行稀释涂布平板分离。 2)快速平板显色分离方法将富集过的培养液用无菌水稀释，分别涂布在细菌和霉 菌初筛平板上。32℃培养，相隔6h定期观察结果，将具有变色圈的菌落选出，挑至斜面 培养基上培养，待菌苔长出镜检直至获得单株纯培养后斜面保存，备用。 1．3菌种复筛 1．3．1酯酶产生菌的复筛培养基