不同抗性油菜菌核病菌生物学性状研究.pdfVIP

第七届全国农药交流会论文集 57 不同抗性油菜菌核病菌的生物学性状研究 刘曼慧，刘德俊，黄青春 (华东理工大学药学院) 油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum(1ib)debery)是引起油菜发生菌核病的重要病原真菌。田问监 测表明，油菜菌核病是间隙性流行的病害，易导致防治不及时而造成油菜产量的重大损失。目前，国内外 尚缺乏优质的油菜抗病品种，油菜茵核病的防治主要是通过施用化学杀菌剂。众多文献表明，田问油菜菌 核病菌对多种药剂已产生抗性，甚至交互抗性或多抗性。油菜菌核病菌田间菌株对多菌灵敏感性表型呈多 样性，有敏感型、低抗型、高抗型、甚至超高抗型。p一微管蛋白基因198和200位氨基酸的突变可能是引 起油菜菌核病菌对多菌灵抗药性呈多样性的分子机理。油菜茵核病菌田间菌株还对乙霉威表现敏感型和高 抗型，尽管多茵灵和乙霉威之间存在典型的负相关交互抗性。本实验室通过室内研究，相继获得了油菜菌 核病菌多菌灵抗性的、异菌脲抗性的、TCSA抗性的等突变体。本文对这些突变体的生物学性状进行研究， 旨在阐明不同类型和不同抗性水平油菜菌核病菌的生物学特性，为该病害的田间防治和抗性的综合治理提 供理论依据。 1材料与方法 1．1供试菌株 油菜菌核病菌多菌灵抗性菌株Hml0和敏感菌株Ss01，均由本实验室长期保存。异菌脲抗性菌株ZW．6 ZW．6(Y)诱变得到的。 1．2实验试剂 异菌脲原药(95％)，由江西快达公司提供。多菌灵原药(95％)，由江阴农药厂生产提供，预溶于 由江苏南通农药厂提供。三唑醇原药(95％)，由江苏七洲农药研究所提供。四氯水杨酰苯胺(99％纯度)， 购自Acros公司。 以上药剂均溶于N，N．二甲基甲酰胺(DMF)中，配制成浓度为10，0001．tg／ml的母液，备用。 1．3不同菌株对异菌脲和TCSA的抗药性水平测定 有不同浓度药剂的PDA培养基培养皿中，置于25。C恒温培养至48h时，测量菌落直径，计算药剂对病原 菌的生长抑制率，并用线性回归法计算各药剂的EC50值。各处理做3个重复。以不含药培养基为对照。 的平均值．各处理的平均值)／对照的平均值×100％ 1．4菌丝生长速率及菌核形成的比较 菌株做3个重复。 1．5不同菌株的致病力比较 58 优秀论文 采集同一片油菜地里，大小一致，位置相同的叶子，洗净，晾干，用接种针在叶片上刺一小孔，将在 生长边缘用打孔器打取直径为6mm的菌碟，分别接种于刺伤伤口处，接种后置于20(2湿度为100％的环境 下，5天内逐日观察发病与否，并测量病斑面积，每菌株测3次重复。并且提取病斑中的各种酶进行测试。 1．6不同营养物质对菌丝生长的影响 将不含糖的马铃薯培养基熔化，分别加入等量的葡萄糖、甘露醇、蔗糖、淀粉、半乳糖、麦芽糖、果 糖、乳糖、蛋白胨和硝酸钾，制成含不同营养物质均为15％的PDA平板。从PDA培养基上培养48h菌落 营养物质对菌丝生长的影响，每个处理做3个重复，以不加营养物质的培养基为对照，计算菌丝生长的抑 制率(％)。 1．7温度对菌丝生长的影晌 直径，以确定温度对菌丝生长的影响，每个处理做3个重复，以25C条件下生长为对照，计算菌丝生长的 抑制率(％)。 1．8不同pH对菌丝生长的影响 测量菌落直径，以确定pH值对菌丝生长的影响，每处理做3个重复，以没经调节的PDA培养基为对照， 计算菌丝生长的抑制率(％)。 1．9不同菌株的交互抗性 等，比较不同药剂对各菌株的毒力大小。 2结果和分析 2．1不同耐药菌株对异菌脲和TCSA的抗药性水平 表l 不同菌株对异菌脲的抗性水平 的EC50没有增加，即抗性没有增强，但是MIC大大增加了，说明诱变后菌株对TCSA的耐药性提高了。 2．2菌丝生长速率及菌核形成比较 第七届全国农药交流会论文集 59 都敏感的Ss01菌株生长速率最快。 表2不同菌株对TCSA的抗性 0 9