基于核酸适配体荧光纳米生物传感器对双组分蛋白的检测研究.pdfVIP

V01．30 第30卷专辑 南昌大学学报(理科版) Suppl of 2006年9月 Journal Science) NanchangUniversity(Natural Sept．2006 141—02 文章编号：1006一0464(2006)专辑一I 基于核酸适配体荧光纳米生物传感器对双组分蛋 白的检测的研究 程圭芳，张帆，徒永华，何品刚，方禹之 (华东师范大学化学系。上海200062) 摘要：核酸适配体技术是近年来发展起来的一项新型检测技术，它具有与免疫蛋白检测技术相媲美的有点。本 文采用在磁性纳米颗粒上生长碳臂共价键合作用固定蛋白，以增加蛋白的活性，用标记了不同荧光基团的核酸适 配体检测不同的目标蛋白。论文对蛋白固定方式进行了研究并优化了固定条件。在优化条件下。对同一样品中双 x10_，mol／L至7．50x10。mol／L之间 组分蛋白同时进行了定量分析。目标蛋白(凝血酶与溶菌酶)浓度在1．20 x 时，荧光峰强度与蛋白浓度成线性，其线性方程分别为I=62．0910’c。m。+1．7213，相关系数r为0．9962；I=31． 32x109 mol／L，溶菌酶检测限为9．5×10“omol／L。此方 ch…+33．53，r=0．9908，凝血酶检测限为6．2×10“o 法可同时检测样品中的双蛋白组分，检测信号互不干扰，信号响应线性范围好。 关键词：适配体，蚤白检测，荧光，多组分测定 中田分类号：0657 文献标识码：A 蛋白质的结构功能及活性有动态和复杂的变 在517nm及578am处的荧光强度，可对同一溶液 异，它们的变化往往和疾病的发生有关¨口1，并为疾 中两种目标蛋白进行定性和定量检测。 病的早期诊断和预后提供分子标志】。对生物样 2结果与讨论 品中多组分蛋白进行定性和定量分析是研究蛋白质 组学的一个重要部分。核酸适配体荧光检测蛋白主 2．1检测机理 要是基于适配体与目标蛋白作用之后产生的荧光偏 2．2固定活性研究 振度Ho或是荧光强度H1的改变来检测蛋白。我们 由于蛋白具有生物活性，并且其分子较大，直接 曾经采用三明治结构核酸适配体来检测单一活性蛋 固定于磁性纳米颗粒会使导致蛋白失活。本文在磁 白哺1，取得很好的结果；但此种技术对应有二个活 性纳米颗粒(MNPs)表面修饰具有一定空间长度的 性位点的蛋白检测非常有效，但对多蛋白体系的同 柔软碳臂链，在将蛋白固定在碳链上达到保持蛋白 时检测却存在局限。凝血酶和溶菌酶是人体血液中 生物活性的目的(Tabj)。 二种重要的蛋白，对这二种蛋白的检测研究具有重 要的临床医学意义。本文通过在磁性纳米颗粒表面 生长碳臂来固定目标蛋白质分子，用不同荧光分子 标记与目标蛋白对应的核酸适配体，达到同时检测 多种蛋白、提高检测的选择性和灵敏度的目的。 }—”一 点-％一 Schematic offluorescent l 实验部分