基于LC%2bLC%2fMS方法肺癌代谢组学研究.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．HOIO 基于LC+LC／MS方法的肺癌代谢组学研究 杨芹，王媛，许国旺¨ 16023) (中国科学院大连化学物理研究所，中科院分离分析化学重点实验室大连1 摘要：本实验以一种新的LC+LC流路同时对正常入及肺癌病人尿样中的亲水和疏水组分进行分析， 并经多变量数据分析，得到一系列既有亲水性也有疏水性化合物的潜在生物标记物。 关键词：代谢组学，肺癌，LC+LC／MS方法 1 前言 肺癌一由肺部细胞病变直接(而非其它癌变的转移)引起的肺部细胞异常增生一是较常见而死 亡率也极高的【11，究其诱因虽个别与个体遗传因素有关，但大部分还是由外部环境尤其是吸入烟草 烟雾中的一些芳香类致癌物或石棉等杂物所致。肺癌主要可分为四种类型，归结为两大类，第一类 是小细胞肺癌，第二类，也是最常见的一类，是非小细胞肺癌，包括鳞癌、腺癌和支气管肺泡癌。 目前，对肺癌的研究主要集中于基因及蛋白组学【2，3】方面，但对其病理生理学仍知之甚少【2】。文献报 道【4】，若能在早期诊断，获得及时治疗则5年存活率可由目前大约14％上升至48％。若是能从代谢 组学角度出发，通过对生物体液等样品的分析，找到可诊断肺癌的潜在生物标记物，则可及早治疗 提高该疾病的治愈率。 常规生物样品诸如体液在分析时，一般用较适合分析疏水性组分的反相色谱(RPLC)，但是这样 一些亲水性较强的组分会在死时间流出，从而无法得到分离及检测，导致样品的实际信息部分被丢 失，可能遗失潜在生物标记物。若是用亲水色谱(HILIC)，则类似地会丢失一些疏水|生化合物的信息。 而对生物样品常涉及的体液如尿样、血样来说，无论亲水还是疏水组分都是其重要组分，对展现样 品的整体信息来说不可或缺。 换将亲水色谱与反相色谱串联，可将样品中的亲水组分和疏水组分同时保留分析，最大保留了样品 的信息。 2 仪器及实验方法 2．1 仪器：Shimadzu SCIEX，USA) 柱温箱(CTO一20A，含一内置二位六通阀)；QTrapLC／MS／MS(AppliedBiosystems／MDS 质谱仪作检测器。 2．2 样品：健康人(32例)及肺癌病人(35例)尿样： 2．3 实验方法： 分析：采用二根分析柱及一根安装在六通阀上的捕集柱完成全程分析。第一根分析柱为TSKgel OOmM醋酸铵)， 0．2mL／min；第二根分析柱是Hypersil ACN，1．0mL／min(进MS，分流至约0．18mL／min)；中间以Hypersil 大连)作捕集柱，水作辅助流动相将第一根柱死时间流出组分通过六通阀的切换转移至第二根柱上进 行后续分析；两根分析柱柱后皆连入十通阀并通过其阀的切换进入MS离子源，检测。 ”通讯联系人，许国旺，xugw@dicp．∞．∞ 1067 第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 检测：ESI离子源，正离子模式下全扫(EMS)采集数据；具体参数如下：Mass IS 三竖六。采集谱图示例如图l。 肌酐的测定：测肌酐浓度，所得数据拟采用肌酐校正法进行归一化。 一一一”……… “～“……“““1。“…。 ” ∞∞∞ 图1：尿样在LC+LC(HILIC+RPLC)流路上分析的谱图 3结果与讨论 所有采集数据经MarkerView软件(version SCIEX，USA)处理，提 1．1，AppliedBiosystems／M