微绿球藻DNA质粒文库的构建.pdfVIP

微绿球藻 D NA 质粒文库的构建 赵大显 ,周志刚 (上海水产大学 农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室 , 生命科学与技术学院 ,上海 200090) ( ) 摘要 :微绿球藻 N annochlorop s is oculata DNA 被提取纯化并经超声波处理后 ,将所得大小在 1. 6～3 kb 之间的DNA 片段用 T4 DNA 聚合酶补平 ,再与 S ma I 酶切消化并经去磷酸化处理 ( ) 的质粒载体 pUC18 连接 ,转化至 D H10B 大肠杆菌 Escherichia coli 的感受态细胞中。建立的 4 DNA 质粒文库容量含 2 ×10 个克隆 ,其中重组子占90 % 。随机挑选白色菌落并培养 ,抽提的 质粒经 X ba I 和 S ac I 双酶切鉴定 ,显示重组的质粒中均含有大小不等的DNA 插入片段 。 ( ) 关键词 :微绿球藻 N annochlorop s is ocul at a ;超声处理 ;质粒载体 p U C18 ;DN A 文库 中图分类号 :Q78 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2006) 　　在系统分类地位上 ,有人[ 1] 认为微绿球藻或眼 不用鲍鱼酶处理细胞壁外 , 其他操作步骤均按 Hu ( ) [25 ] 点拟 微 球 藻 N annochlorop s is ocul at a 属 绿 藻 门 等 叙述的方法提取 DN A 。 ( ) ( ) [2 ,3 ] Chlorop hyt a 、绿藻纲 Chlorop hyceae , 也有人 1. 3 　外源插入片段制备 ( ) ( 认为它属金藻 门 Chrysop hyt a 、真眼点纲 Eu stig μ 取 DN A 4～5 g 于 1. 5 mL Epp endoff 管中 ,用 matop hyceae) 。微绿球藻是单细胞藻 ,呈球形 ,直径 2 超声波按工作 2 s , 间歇 10 s 的程序多次重复处理 , μ ～4 m ,单独或集合 ,色素体一个 ,淡黄绿色 ,侧生 , μ 仅 占原生质体的一部分 ,无蛋 白核 , 有淀粉粒 1～3 并在重复过程中 ,取 10 L 已处理的样品 ,用 1 % 的 个 ,细胞壁极薄[ 1] 。微绿球藻细胞富含二十碳五烯酸 琼脂糖凝胶电泳观察处理效果 ,尽可能使大部分处理 ( EPA) [4 ,5 ] 、蛋白质 、维生素等物质 ,是健康食品和药 的DN A 片段集 中在 1. 6 ～3 kb 之间。然后用 T4 品的重要资源之一 。其中 , EPA 不仅是水产动物幼 (