Percoll密度梯度离心法分离大鼠肺Ⅱ型上皮细胞.pdfVIP

2009年 8月 中国比较医学杂志 August，2009 第 19卷 第 8期 CHINESEJOURNALOFCOMPARATIVEMEDICINE V01．19 No．8 e g技术方法 $ 蛤 、蛤 、嘧 、 Percoll密度梯度离心法分离大 鼠肺 Ⅱ型上皮细胞 马 铃 ，洪 涛，陈卫民 (中国医科大学附属盛京医院麻醉科 ，沈 阳 110004) 【摘要】 目的 建立大鼠肺泡 Ⅱ型上皮细胞 (AT．Ⅱ)的改良体外原代培养法。方法 采用循环冲洗、支气管 灌洗 、胰蛋 白酶消化、滤网过滤并用轻 比重及重 比重 Perco11密度梯度离心，分离 AT’Ⅱ。原代培养后通过碱性磷酸 酶 (alkalinephosphatase，AKP)法和 电镜鉴定 AT-Ⅱ。结果 经 AKP染色和 电镜鉴定所得 的 A．r-Ⅱ纯度为 (80．2± 6．3)％，每只大鼠可分离出 1X107AT一Ⅱ。结论 采用 Percoll密度梯度离心法能分离出较高纯度的AT一Ⅱ。 【关键词】 肺泡 Ⅱ型上皮细胞；Percoll离心；原代培养；鉴定 【中图分类号】R329 【文献标识码】A 【文章编号】1671．7856(2o09)08．0067—03 IsolationofRatType ⅡAlveolarEpithelialCellsbyDiscontinuous PercollGradientCentrifugation MA Ling，HONG Tao，CHEN Wei—min (DepartmentofAnesthesiology，ShengjingHospitalofChinaMedicalUniversity，Shenyang110004，China) A【bstract】 Objective ToinvestigatetheprimarycultureoftypeⅡalveolarepithelialcellsisolatedbydiscontinuous Percollgradientcentrifugation．Methods Afterperfusionviathepulmonaryartery andbronchoalveolarlavagewithnormalsaline， htelungsweredigestedwiht trypsin，chopped into 1to2him cnbesandfilteredhtrough 100 and500meshesfilters．Thecell mixturewaspurifiedbycentrifugationOffadiscontinuousPercollgradient(density1．089and1．04，400g，20min)．Electron microscopyandalkalinephosphatasestainingwereusedtoidentifyhtetype Ⅱ alveolarepihtelialcells．Results Thepurityof typeIIepihtelialcellswas(80．2±6．3)％ andhteproductrateoftype