胶体金免疫层析试纸结合RT-PCR法快速检测烟草环斑病毒.pdfVIP

维普资讯 第26卷 第 3期 上 海 交通 大 学 学报 (农业 科 学版) JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(AGRICULTURALSCIENCE) Vo1．26No．3 2008年 6月 Jun．2008 文章编号：1671—9964(2008)03—0208-04 胶体金免疫层析试纸结合 RT—PCR法快速检测烟草环斑病毒 杨翠云 ，魏梅生 ，于 翠 ，乔艳艳 (1．上海出入境检验检疫局，上海 200135；2．中国检验检疫科学研究院 动植物检疫研究所，北京 100029) 摘 要：利用烟草环斑病毒胶体金免疫层析检测试纸条，对烟草环斑病毒3个分离物进行了快速检测。结果表明，试纸条在 10 mi内．可特异性检出烟草环斑病毒的3个分离物，对番茄环斑病毒、南芥菜花叶病毒、番茄黑环病毒和健康叶片无反应。剪下 试纸条上显示的检测带，进行RT—PCR，能扩增到与预期大小相同的DNA条带。试纸条检测烟草环斑病毒粗提纯液，检测灵敏 度在 1g．mE-1，试纸条检测烟草环斑病毒的病汁液，检测灵敏度在 10。(w／v)，试纸条检测灵敏度与DAS—ELISA方法灵敏度基 本相 同。 关键词：烟草环斑病毒 ；胶体金免疫层析；试纸条；RT-PCR 中图分类号：$41—30 文献标识码：A TheRapidDetectionofTobaccoRingspotVirusbyGold ImmunochromatographyAssayandRT-PCR YANGCui-yuni，WElMei-shen ，YUCuii，QlA0Yan-yanl (1．ShanghaiEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Shanghai200135，China； 2．InstituteofAnimalandPlantQuraantine，CAIQ，Beijing100029，China) Abstract：Threeisolatesoftobaccoringspotviruswererapidlydetectedwithgoldimmunochromatographyassay(GICA，Immunos- trip)．Theresultsindicatedthatthe3isolatesofTRSVcouldbetestedspecificallyonimmunostrlpwithin10minutesandno—specific reactionwasobservedfortheToRSV，ArMV，TBRV andhealthyleaves．RT—PCR amplificationcouldproduceaspecificDNA bandof theexpectedsizewiththereactionbandcutonimmunostrip．Th esensitivityoftheimmunostripwas1Ixg·mL一forthepartialpurified viurses．ExtractfromTRSV—infectedtobaccoleaveswasdetectedtoadilutionof10～(w／v)．Thesensitivityoftheimmunostripnad DAS—ELISA wasalmostthesame． Keywords：tobaccoringspotviurs；immunochromatographyassay；immunostrip；RT-PCR 烟草环斑病毒 (Tobaccoringspotvirus，TRSV) 种植物病害，严重时导致绝产，是我国禁止入境的危 为豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒 险性有害生物。由于TRSV是可随种子苗木调运进 属 (Nepoviurs)成员，广泛分布于 日本、澳大利亚、新 行远距离传播的