不同月龄大鼠胰岛细胞衰老及胰岛素表达的研究.pdfVIP

· l80 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(1)：180—182 [文章编号] 1000—4718(2009)0l一0180—03 不同月龄大鼠胰岛细胞衰老及胰岛素表达的研究 林晖榕 ， 陈慎仁 ， 傅玉才 ， 耿义群 ， 许铭炎 ， 林 超 (汕头大学医学院 。第二附属医院内分泌科 ，病原生物学教研室 ，广东 汕头 515031) [摘 要] 目的：探讨不同月龄大鼠胰岛细胞衰老的情况及胰岛素的表达。方法：40只大鼠分为4组：新生 大鼠组、1个月大鼠组、6个月大鼠组、24个月大鼠组，取大鼠胰腺 ，行 13一半乳糖苷酶 (SA一31一Ga1)染色并检测胰 岛内p16的表达以反映胰岛细胞衰老，检测胰岛内胰岛素的表达。结果：随年龄增长，胰岛内p16表达增加，分别 为：新生组 0；1月组0．00267±0．01534；6月组 0．05290±0．01787；24月组 0．24526±0．03191(P0．01)。31一Gal 染色阳性(阳性率、着色面积、着色深浅程度)增加也与增龄相关 ，新生组大鼠胰岛31一Gal染色均为阴性，其它各组 阳性率 1月组为2％，6月组为 15％，24月组为 100％(P0．01)。着色面积 1月组为0．040，6月组为0．218，42 月 组为2．118。着色程度 1月组为0．04，6月组为0．18，42 月组为2．41。结论：随年龄增长，胰岛细胞衰老增加 ，胰岛 素表达减少。 [关键词】 胰岛；细胞衰老；半乳糖苷酶类；胰岛素 [KEYWORDS] IsletsofLangerhans；Cellaging；Galactosidases；Insulin [中图分类号] R363 [文献标识码] A 2型糖尿病 (type2diabetesmellitus，T2DM)是以胰岛 2 取材 素抵抗和胰岛B细胞分泌缺陷为特征的疾病。T2DM患者在 各组大鼠用2％戊巴比妥麻醉后处死 ，取胰腺(新生组、1 发病早期甚至发病前数年即存在胰岛素分泌缺陷。另外，流 个月组)或胰尾 (6、24个月组)，4％多聚甲醛固定 12h，常规 行病学调查发现，随年龄增长 ，糖耐量下降，T2DM患病率升 脱水，石蜡包埋 ，组织切片机切片，厚度为3 m。 高，年龄增加对胰岛B细胞功能有负面影响 J。在非DM 3 主要试剂 和DM老年人中，普遍存在胰岛素分泌受损 。这些资料显 小鼠抗大鼠胰岛素单克隆抗体 (产品编号：BM0080)、小 示T2DM的发生发展与机体的衰老有关。 鼠抗大鼠p16多克隆抗体 (产品编号：BA0266)购 自武汉博士 细胞衰老是指细胞停止分裂，功能趋于减退。衰老细胞 德生物工程有 限公 司；streptavidin—peroxidaseconjugated 发生了形态学及某些酶活性或基因表达的改变 。在形态 method(sP)免疫组化试剂盒系ZYMED产品。 学上，细胞变大且不规则 ，细胞核不规则并出现不正常分裂， 4 免疫组化染色 细胞器衰变，染色体端粒缩短，基因表达或酶活性的改变 ，如 采用链霉亲和素 一过氧化物酶连结法 (sP法)。组织切 31一半乳糖苷酶 (beta—galactosidase，31一Ga1)表达及活性明 片脱蜡后 ，在3％H：O：中室温孵育 10min，以消除内源性过 显升高。因此，31一Gal已成为确定细胞衰老的标志：基因 氧化物酶 的活性 ；10％ 山羊血清封 闭 15min，加入 I抗 p16 “(p16)、小鼠的p19 或人类 的p14 、053、021p1 (1：100稀释的抗p16多克隆抗体或 1：200稀释的抗胰岛素单 (p21)等表达水平发生改变 。胰岛B细胞衰老相关报道较 克隆抗体)，4oC过夜；生物素标记 Ⅱ抗，37℃孵育30min；辣 少 ，Halvorsen等 的研究发现，体外培养人胰岛B细胞时，胰 根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育30min后，苏木素复 岛B细胞衰老的形态学改变与其它衰老细胞相似，也 出现 染，封片，显微镜下观察并拍照。每个标本检测3张非连续切 8一Gal活性增加以及 p16基因表达增加。因此 ，我们选择 片，用PBS代替I抗