琼脂糖凝胶电泳分离纯化和制备质粒DNA.pdfVIP

遗传＿HEREDITAS(Beijing) 3(2);37-39198 琼脂糖凝胶电泳分离纯化 和制备质粒DNA 郭三堆郭兴华 陈乃用贾士芳 门大鹏 （中国科学院微生物研究所，北京） 分离纯化质粒DNA，在遗传工程和质粒的 品收集室，体积约为0.6毫升。5;是间隔胶， 分子遗传学研究中是重要的一环。分离和制备 琼脂糖浓度为 1%，用来防止样品凝胶碎片滑 质粒 DNA的方法很多，有：澳化乙锭密度梯度 人到样品收集室内。(46是样品胶，含有我们所 祛。一，，、两相法 “，、酸酚法71〔碱变性法81「、甲基化 要纯化制备的质粒 DNA,7”是电泳管狭缝， 白蛋白M（AK）柱层析法91「`硝酸纤维素法uo1、电 宽为0.2厘米，长度可为 10厘米、20厘米和30 泳法L川等，这些方法都各有所长。根据质粒的超 厘米等，可按不同规格的管长来选择。它的作用 卷曲结构、开环结构和线状结构的不同，各个质 可供在紫外光下观察加有 EB的DNA洗脱情 粒分子量大小的不同，以及质粒 DNA与RNA 况，以及抽取样品洗脱液。8;是电泳管，内径 和染色体 DNA在电泳中迁移率的不同，在我 1.5厘米，外径 2厘米，管长有 10厘米、20厘米 、 们实验室的条件下，研制了一种琼脂糖凝胶电 30厘米、40厘米等，可按制备样品的多少来选 泳分离纯化和制备质粒 DNA装置。运用这种 择管长。整个装置，全是用有机玻璃为材料，由 装置，纯化制备了以下质粒：pBR322,pASI, pUB110、F}lac+proA+B+,pVA517A,pVA517B, pVA517C,pVA517D,pVA517E,pVA517F, pVA517G和pVA517H。并且对它们进行了电 镜观察，对其中纯化过的pBR322和pASI质粒 进行了转化实验，证明它们有生物活性。同时， 应用这种装置，可以一次分离具有不同分子量 大小的几种质粒，回收率约为85多。结果表明， 这种装置结构简单，操作方便，是纯化制备质粒 图 1 电泳纯化制备质粒 DNA装置示意图 DNA的一种可用工具。 我们所工厂制成。 材 料 和 方 法 （二）菌株 实验用的所有菌株和其质粒DNA，全列于 一（）电泳纯化制备装置 表 1。其中，pAS1是由pBR322和枯草芽抱杆 整个装置结构如图1所示。在图1中，+I 菌SR22的一段染色体 DNA组成，这段染色 是电极，正负极导线都是铂金丝，长为22厘米。 体DNA携带的遗传性状尚不清楚。大肠杆菌 a2”是电泳缓冲液槽，长 11.5厘米，宽7.5厘米， GM1作为测定pAS1和pBR322生物活性的受 高 10.5厘米。 “3’’是透析膜，直径 1.8厘米。 4;是橡皮圈，直径 1.1厘米，大头外径 1.6厘 CuoSandutetal.:TheSeparationPurificationand PreparationofPlasmidsDNA by Agarose Gel 米，小头外径 1.5厘米，与透析膜可形成一个样 Electrophoresis 37 裹1 实验所用的菌株和质较 菌 株 菌中质粒 质粒抗药性标记 菌株的来源 枯草杆菌 BD366 pUB110 Km／Neo` J.Spizizen赠送 H BI01 pASI Ap`Tc` 本组保存