睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因载体构建及在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2008,16 (4): 681~686  ·研究论文 · 睾丸酮丛毛单胞菌 基因载体构建及在大肠杆菌 中的表达 *  1 2 ** 1 2 2 1 1 1  陈建秋  ， 潘大仁  ， 周 以飞  ， 卢文标  ， 程晓春  ， 王占成  ， 陈雅艳  ， 林 钿  (1. 350002 2. 350002)  福建农林大学作物科学学院 ， 福州 ； 福建农林大学生命科学学院 ， 福州 ： (  ) DNA PCR pKtac2  摘要 提取睾丸酮丛毛单胞菌 基 因组 ， 利用 扩增 基 因 ， 将扩增产物克隆到 ( ) pK18 pKtac2­ pK (  )HB101 含强启动子 和 中， 构建重组质粒 和 。 将重组质粒分别转化大肠杆菌 ， ， ，结果表 明 ：含 ， 提取细菌总蛋白 ELISA 测定细菌总蛋白 中 TeiR蛋 白的表达量 强启动子 的 pKtac2­ 转化大肠杆菌后 TeiR 6.65 g/mg pK 0.72 g/mg p6( ) 蛋白的表达量可以达到 滋   ， 比 的表达量高出 滋   。将 含 基因 分别和重组质粒 (pKtac2­ 和 pK  )共转化大肠杆菌 HB101， 测定细菌总蛋 白中 3a­HSD/CR 和 TeiR 的表达量 ， 结果表 明 ： 在大肠杆菌 ， 中 基 因可 以明显促进 基 因的表达 pKtac2­ 与 p6 共转化大肠杆菌后 基 因的表达量 比 pK 与 p6 共转化后 基 因的表达量高 ，其 TeiR 蛋 白表达量分别 为 5.94 和 5.33 g/mg；添加终浓度