紫藤脉花叶病毒cp基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备.pdfVIP

维普资讯 第 l9卷 3期 中 国 病 毒 学 l9 (3)：281．284 2004年 6月 VIROLOGICA SINICA June2004 紫藤脉花叶病毒 cp基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备 梁文星 ，宋丽敏 ，黄金光 ，田国忠2，李怀方 ，范在丰 (1．中国农业大学植物病理系，北京 100094； 2．中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 ，北京 100091) ExpressionofthecpgeneandAntiserum PreparationofW isteria VeinM osaicViur s LIANG Wen—xing ，SONG Li—min ，HUANG Jin—guang ，TIAN Guo—zhong ，LIHuai—fang ，FAN Zai—feng rJ．DepartmentofPlantPathology,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China；2．ResearchInstituteofForestEcology, EnvironmentandProtection，ChinaAcademyofForestry,Beijing100091，China) Abstract：Thecoatprotein(CP)geneoftheBeijingisolateofWisteriaveinmosaicvirus(WVMV-BJ) wasamplifiedbyRT-PCR，nadligatedtohteexpressionvectorpET22b(+)．Therecombinnatplasmid pET-WVMVCPwastrnasformedintoE coliBL21(DE3)andhteninducedbvI G Itwasshonhtat hteC尸 genewashighlyexpressedbySDS—PAGE nadW esternblotanalysis．Themolecularweightof therecombinna tproteinwasabout34．4kDa．Antiserum withhighspecificitywasproduced afterthe rabbitwasimmunizedwiht purifiedrecombinna tprotein．andthetiterwasdeterminedtobe1／1024by micro—precipitation，or1／8192bynatigencoatingplate—ELISA(ACP-ELISA)． Keywords：Wisteriaveinmosaicviurs；CP：Prokaryoticexpression；Antiserum；ELISA 摘要：采用RT-PCR方法 自紫藤脉花叶病毒北京分离物 (WVMV-BJ)的基因组中分离出其CP基因，连接到原核 表达载体pET22b(+)上。获得的重组子pET-WVMVCP转化大肠杆菌BL21(DE3)后，用 IPTG进行诱导表达。 SDS．PAGE和Westernblot分析表明， 基因在大肠杆菌中获得 了高效表达，融合蛋白分子量约为34．4kDa。将 融合蛋 白纯化后免疫兔子，获得了特异性较高的抗血清。微量免疫沉淀法测定该抗血清的效价为 1／1024，酶联法 (enzyme—linkedimmunosorbantassay，ELISA)测定的效价为 1／8192。 关键词：紫藤脉花叶病毒；外壳蛋 白；原核表达；抗血清；ELISA 中国分类号： $432．4．1；$435．131．4 文献标识码：A 文献编号：1003．5152(2004)03．0281．04 紫藤作为城市园林绿化美化的重要植物，在公