屎肠球菌临床分离株中磷霉素耐药基因fosB的分布.pdfVIP

344 中国感染与化疗杂志2011青年优秀论文集 屎肠球菌临床分离株中磷霉素耐药基因 j=oSB的分布 陈春辉， 郭庆兰， 郭 燕， 叶信予， 朱德妹， 李光辉，徐晓刚， 王明贵 (复旦大学附属华山医院抗生素研究所，上海200040) 摘要： 目的肠球菌属细菌是医院感染的重要病原菌之一。根据近年的细菌耐药性监测资料，屎肠球菌在临床分离 肠球菌属细菌中的比率在逐年上升，其对磷霉素的耐药性也日益严重。我们前期采用Solexa高通量测序筛选技术，首 次发现了质粒介导磷霉素耐药基因如sB在磷霉素耐药屎肠球菌中的存在，并证实了其功能。本研究通过检测磷霉素 耐药基因在临床分离株中的分布，分析耐药基因阳性菌株的同源性，明确此类耐药基因在屎肠球菌对磷霉素耐药性形 成中的作用。方法收集临床分离屎肠球菌144株，通过药敏试验并用PCR技术测定磷霉素耐药基因fosA、fosB、 ，DsC，了解屎肠球菌临床分离株对磷霉素的耐药性及耐药基因的分布；采用脉冲场电泳(PFGE)对磷霉素耐药基因阳 性菌株进行同源性分析。结果144株屎肠球菌临床株中，对磷霉素耐药(MIC，1024mg／L)者9株；磷霉素耐药基因 检测结果显示，9株磷霉素耐药株fosB基因阳性，其余135株均为阴性。PFGE结果显示，9株磷霉紊耐药基因阳性菌 株分属不同克隆，相互之间无同源性。结论质粒介导的磷霉素耐药基因，DsB在屎肠球菌对磷霉素耐药性形成中具 有重要作用，该基因借助质粒传播，可能是屎肠球菌对磷霉素耐药性迅速上升的主要原因。 关键词：磷霉素；耐药；基因；屎肠球菌 肠球菌属(Enterococcus sp．)细菌是临床重要条件致病菌，不但可引起尿路、腹腔、伤121等常见感 染，而且可导致败血症、心内膜炎等危及生命的重症感染。近年来肠球菌感染呈增多趋势，已成为医 院感染的主要病原菌之一。近年我国的细菌耐药性监测资料显示，屎肠球菌不但在临床分离肠球菌 属细菌中的比率在逐年上升，而且对磷霉素的耐药性也日益严重[1。]。在vanM型万古霉素耐药肠球 菌研究过程中[4]，我们发现伴随vanM基因接合转移的同时，磷霉素的耐药性也可转移至受体菌。采 用高通量测序方法对1株磷霉素和万古霉素等多种抗菌药物耐药的屎肠球菌进行了耐药基因筛选， 并对耐药基因进行了克隆分析，我们首次报道了磷霉素耐药基因如sB在屎肠球菌中的存在，并初步 验证了其功能[5]。本研究意在通过对临床分离屎肠球菌中如sB等质粒介导耐药基因的分子流行病 学研究，以及此类耐药基因与磷霉素耐药相关性分析，进一步明确如竭基因在屎肠球菌磷霉素耐药 性形成中的作用。 材料与方法 一、材料 (一)菌株来源144株屎肠球菌为2008--2009年临床分离株；药敏测定用质控株粪肠球菌 ATCC29212及．厂DsB基因阳性对照株Efm-HS0661为本研究所保存菌株。 (二)主要试剂及仪器Mueller 准品购自中国药品生物制品检定所；引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；盐酸三羟甲基 国Bio-Rad公司产品；PCR试剂为大连宝生物公司产品。 二、方法 2010版 (--)药敏测定采用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MICs)，方法及判断标准参照CLSI 文献[6]，由于屎肠球菌暂无磷霉素MIC判断标准，故参照粪肠球菌标准。 中国感染与化疗杂志2011青年优秀论文集 345 Tris—HCl，1 mI．TE(10mmol／L (二)屎肠球菌DNA模板制备挑取1～2个菌落，加入0．5 EDTA mmol／L rain，5000 pH8．o)中混匀，100。C水浴10 g离心5rain取上清液备用。