甜菜nia基因的克隆及不同氮素形态诱导的差异表达.pdfVIP

AcrAAGRoNoMIcAs玳ICA 作物学报 201l，37(11)：1949-1955 ISSN TSHFIA9 0496．3490；CoDEN DoI：lO．3724，SP．J．1006．2011．01949 甜菜以施基因的克隆及不同氮素形态诱导的差异表达 丁广洲1，2 侯 静2 陈 丽1 马凤鸣2·。 陈连江1，+ 1中国农业科学院甜菜研究所，黑龙江哈尔滨150080；2东北农业大学，黑龙江哈尔滨150030 摘要：利用同源序列克隆方法从二倍体甜菜品种耐7中获得氮素诱导，l缸基因片段，通过RAcE技术克隆n缸基因 718 全长序列，该基因0RF长度2 kD，以NADH为电子供体。为揭示不同氮素形态和处 贝数存在。n缸编码蛋白的等电点为6．12，推测分子量为102 理对甜菜n缸基因表达的影响，采用半定量PCR方法检测不同氮素形态诱导n谊基因mRNA的表达，同时测定酶活 力。结果表明，当铵态氮诱导n胁基因时，低浓度的铵离子能促进基因的表达，过高浓度的铵离子抑制基因的表达。 当硝态氮诱导忍缸基因时，随处理浓度的增加，n缸的表达加强，呈正相关关系。用30删nolL_1硝态氮诱导4h后，n谊 基因表达达最高值，约在6h后，表达明显下降。 关键词：n缸基因克隆；氮素形态和处理；基因表达 of咒记GemandItsDiffbrential InducedDifferentNitro- CloIling Expressionby Fo珊sin gen SugarBeet∞P纫y醒Z弘，话L．) DING CHEN Lil，MAFeng—Min92’，andLi卸．Jian91’‘ Guang．Zhoul一，HOUJin92，CHEN 1 I璐dn他of of sd％o眠壬I；lrbin1500即。c拉蛆；2Collcge sug盯B。ct alm∞A∞d咖哕0fA鲥饥l加唿l Agriculm琨N‘)nhe鹤tA班伽lhllfal 150030，China Unive描ity，HaIbin clone佗latedt0ni缸atereducdonw嬲i∞lated Abs；t耐：FIDmdiDloidspecies1’y7，acDNA byHomology-b舔edcloIIing．Accor；d— t0its novel te彻ed number：EU oblained illg sequencesiIll’onmtion，afull．I∞星曲cDNAn缸(accession 163265)wasbyusiIlg ofcDNA 247 a2718 905觚血o∞idswima 瑚I口id锄plificationends(RACE)．n妇w舔3bplongcontainingbpORF即coded of6．12．Southem of existedin theoreticalmoleculafweightof102l【D锄d锄isoelectricpoint blotingpfovedmat，l缸geneTy7 tIlefbnnoflow w硒also matttlisclo北wasttle ofNADH—NR．Tbrevealtlleeff＆tofni眦e锄d卸1In伊 copies．n proved s哆le nium m艟