肿瘤坏死因子α在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用.pdfVIP

!望星堑塞垂!!!!生!旦蔓!!堂蔓!塑!!!!』!!巴!：坠!里!翌!!!!：!型：垫：盟!：! ·创面修复探索· 肿瘤坏死因子仪在血管内皮细胞向间质 细胞转化中的作用 代卉黄宏王莎莉徐祥简宇崔文慧张猛张波蒋建新 【摘要】 目的观察TNF-“在血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用．探讨纤维化疾病发生的 机制。 方法取健康胎儿脐带，体外酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，用免疫荧光 法进行鉴定。取第3—5代对数生长期HUVEC分别接种于12孔板和6孔板中，均按随机数字表法分 为6组：对照组．培养液中不加任何刺激因素；5、10、25、50、100ng／mLTNF·q组，分别在培养液中添加 相应终浓度TNF-n，每组3个样本。培养72h后倒置相差显微镜下观察各组细胞形态；免疫荧光法 检测12孔板中各组细胞凝血因子Ⅷ和n平滑肌肌动蛋白(n-SMA)的表达，计算2种因子双阳性细胞 数比值及吸光度值比值；RT—PCR检测6孔板中各组细胞钙黏蛋白、d-SMA和I型胶原mRNA的表达 (以灰度值比值表示)。对数据行单因素方差分析及LSD检验。结果(I)原代培养HUVEC为圆 形、短梭形或扁平形，传代后细胞呈铺路石样旺盛生长。经第l、2、3、4、5次传代后HUVEC凝血因子 Ⅷ阳性表达率分别为(85．5±I．8)％、(88I±5．0)％、(93．6±3．7)％、(92．9±4．8)％、(89．5± I．1)％，明显高于原代培养HUVEC的(81．4±3．8)％，F值均为7．481，P值均小于0．05。(2)对照 TNF-Ⅸ组随着TNF．a浓度 组细胞呈圆形、短梭形或扁平形，细胞间连接紧密；5、10、25、50、100S／mL 的增加，细胞形态逐渐向长梭形转变，细胞间连接减少、间隙变大。(3)对照组中凝血因子Ⅷ、a—SMA 双阳性细胞数比值和吸光度值比值分别为0．055±0015、0．078±0．017。均显著低于5、10、25、50、 100 rig／mLTNF．d组的0257±0．106、0280±0．129、0．505±0．059、0．817±0．035、0．929±0．101和 0．437±0 040、0．456±0．097、0496±0．082、0．787±0131、0．885±0087．F值分别为45009、 50．099，P值均小于001。(4)5、10、25、50、100ng／mLTNF-d组细胞中钙黏蛋白mRNA水平分别为 83± 0．70±0．05、0．63±006、0．60±0．10、0．45±0．16、026±0．14，后4组显著低于对照组的0 0．03，F值均为11．593，P005或P(0．0l。5、lO、25、50、100rig／mLTNF-d组细胞a—SMA和I型 胶原mRNA水平分别为0．45±0．10、051±0．16、0．49±0．12、0．60±0．09、O．76±0．03和0．38± 0．18、0．45±0．15、0．52±012、0 66±0．17、0．76±0．20．后3组2项指标水平显著高于对照组的0．37± 31±0 0．14、0 12。F值分别为7．839、2．898．P0．05或P0．们。结论TNF-a呈明显浓度依赖 性促进HUVEC向间质细胞转化．可能是瘢痕形成中纤维化组织内肌成纤维细胞的又一重要来源。 【关键词】 肿瘤坏死因子“； 内皮细胞； 间质细胞；细胞转分化；肌成纤维细胞 Roleoftumornecrosisfaetornin transitioninvitroDAIHui．日UA们 endothdial．mesenchymal Hong，WANGSha-li，xUXiang，JIANYu．cUfWen·hui，zHANc Be．J|ANGJian—xin． Meng．zHANG NeuroscienceResearch Medicine Medical Center，Pmcli