结合RTPCR体外扩增检测HCVssRNA的研究.pdfVIP

维普资讯 第 19卷 3期 中 国 病 毒 学 19 (3)：214—216 2004年 6月 VIRoLoGICA SINICA June 20o4 结合RT-PCR体外扩增检测HCVssRNA的研究 胡 俊，董长垣 ，汪凡军，陈 晓，郭淑芳，张蔚英 (武汉大学医学院病毒研究所，湖北武汉430071) TheStudyofAmplifingHCV ssRNA byRT-PCR Combined W ithTranscriptioninvitro HUJun，DONGChang．yuan ，WANGFna-jun，CHENXiao，GNOShu．fnag，ZHANGWei．ying (LabofMolecularVirus＆Cance~InstituteofVirology,MedicalCollege,WuhanUniversity,Wuhan430071，ChinaJ Abstraet：Thepurposeofthisstudyistoestablishanew methodwhichHCV RNA Cna beusedtodetect sensitivelynadspecificallythroughefficientsinglestrandRNAs(ssRNAs1amplification．TheSelafrom thechronicnepal,sCr~ientsweaeusedasspedmens．Singlestepleveisertnascription．PCR (SRT．PCR)was performed prospectively，withadesignedsetofprimersWhichdefinedhtesequenceuniquetohte5’ nonco~ngregionofhteHCV genome，agreatdealofspecificSSRNAsweresynhtesizedinhtepresence of RNA polymerase nad ohterappropriate conditionswimin five hours．Comparing wiht hte nested．PCR．htequna tityofhteproduc~ inourmehtodwasnearly20．f0ldhigherna ditsspecificitywas verifiedbyhteelecrtophoresisonagraosegelna dthedothybridizationwithhteprobe． Keywords：HepatitisCvirus(HCV)；I ．PCR：Transcriptioninvitro 摘要 ：本研究 旨在以HCV为平台，在简化RT．PCR基础上，结合体外转录，建立一种特异、高效、简便的检测血 清中HCVRNA的体外转录合成系统。本法扩增终产物为特定极性的ssRNA，其特异性经凝胶电泳和斑点杂交确定； RNA定量分析结果显示本法核酸扩增效率高于巢式PCR近20倍。 关键词： 丙型肝炎病毒：逆转录PCR：体外转录 中图分类号：R5126 文献标识码：A 文章编号：1003—5152．(2004)．03．0214．03 丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus，HCV)感染 文报告的便是一种新的结合RT-PCR体外ssRNA扩 所致的丙型肝炎 (HepatitisC，HC)是一类后果严重 增系统，利用本系统，可以在常规的实验室条件下 的输血传播疾病。大量的临床研究表 明，HC 的预 高效、灵敏、简便的检 出低滴度 的HCVRNA，而 后较 乙型肝炎具有更易于慢性化、重症化、恶性化 且由于本系统最终合成大量单链