免疫组化及PCR操作流程.docVIP

细胞免疫组化步骤1.??PBS冲洗两次2.??丙酮固定10min3.??浸入0.75%H2O2-PBS(30%H2O2 0.05 ml+PBS 2ml) 37℃ 30 min4.??PBS振洗2次,每次3min5.??加封闭血清,湿盒内37℃ 30 min6.??弃去血清7.??加一抗, 37℃ 30~60min (1:200 1:150稀释)8.??PBS振洗3次,每次3min9.??加二抗, 37℃ 30 min10.??PBS振洗3次,每次3min11.??加ABC复合剂, 37℃ 30 min12.??PBS振洗2次,THB(Tris-HCl缓冲液0.5mol/l,PH 7.6 )振洗1次,每次3min13.??浸入新鲜底物溶液（DAB50mg+100ml THB）,在室温下暗处10~20min14.??自来水洗5min15.??染核 浸入苏木素染液2min,自来水洗，迅速过盐酸酒精，自来水洗，过氨水，自来水洗16.??逐级脱水，70％1次，95％2次，无水3次 每次1min17.??透明，过二甲苯3次，每次1min18.??封片 将有细胞的一面向下封片 一、 免疫组化操作规程（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅（二）、试剂1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，K