盐酸克伦特罗分子印迹聚合物制备及其应用研究.pdfVIP

摘 要 盐酸克伦特罗分子印迹聚合物的制备及其应用研究 摘 要 发展简单、快速、高效的新型样品前处理技术一直是动物源性食品 中违禁药物残留检测技术研究的重点和难点。以分子印迹聚合物 （Molecularly imprinted polymers ，MIPs ）为基础填料的分子印迹固相萃 取（Molecularly imprinted solid phase extraction，MISPE），能从复杂样 品中准确富集靶标分子，具有高特异性与高选择性、稳定性好和可重复 使用等优点，已成为近年来食品安全检测领域最具有应用前景的技术之 一。 盐酸克伦特罗（Clenobuterol hydrochloride，CLB ）是一种代表性的 β-肾上腺受体激动剂，其滥用及在动物源性食品中的残留情况十分严 2 重，对人类健康和食品国际贸易带来极大威胁，是我国最主要的违禁药 物残留之一。我国目前CLB的检测常规方法主要有高效液相色谱（High performance liquid chromatography ，HPLC ）、酶联免疫吸附测定（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）等。然而，现有方法在检测动物性 组织类样品时，存在样品前处理时间长、过程繁琐、检测结果假阳性率 高或灵敏度低等严重缺陷。 第 I 页 摘 要 本论文利用分子印迹技术（Molecularly imprinted technology，MIT ） 制备了对CLB具有高特异性、高选择性的MIPs ，进而建立了MISPE程序， 并与ELISA技术结合，建立了动物组织样品中CLB的联用快速检测方法， 显著提高了对动物组织类样品的前处理效率和检测灵敏度。论文主要结 果如下： 1、以克伦特罗为模板，以甲基丙烯酸为功能单体采用本体聚合的方 法制备了针对CLB特异性的MIPs ，利用索氏抽提、热处理和不同溶剂洗 脱等一系列的后处理方法研究了从MIPs 中去除模板残留的处理技术， GC/MS分析实验结果表明，经过处理的MIPs 中模板残留量为1.0 ng/20 mg MIPs ，仅为国际上报道的模板最低本底残留量（30 ng/60 mg MIPs ）的十 分之一。进一步分析评价结果证实MIPs具有较好的印迹效果（α=2.363 ）， 最大吸附量为9.6 µg/60 mg MIPs 。同时，MIPs对目标分子CLB表现出最 高的特异性 （97.1% ），对类似物特布他林、沙丁胺醇的交叉反应较低 （13.0%和22.1% ）。 2、基于我们获得的CLB-MIPs ，建立了从复杂的动物组织类样品中 选择性富集CLB的MISPE技术，上样液为磷酸溶液（3 mM，pH 3.4）： 乙腈 （30：70，v/v ）；淋洗液为依次加入1 mL水，1 mL 2% 乙酸乙腈，1 mL 70% 乙腈水溶液，1 mL乙腈；洗脱液为3 mL 甲醇：乙酸（9：1，v/v ）， 目标分子的回收率约为95.7% 。 3、利用MISPE，从复杂动物组织类样品中选择性富集CLB，最后建 第 II 页 摘 要 立了与常规ELISA快速检测方法的联用技术。与传统基于C18小柱的样品 前处理技术相比，MISPE与ELISA检测结合后，可在0.5，5.0及10.0 µg/kg 三个水平的加标猪肉样品检测中具有更高的精确度和准确性，回收率均 高于99.4% ，灵敏度显著高于C18-ELISA和单独的ELISA检测方法的灵敏 度。 这些工作克服了MISPE在实际应用中存在的本底残留高、无法与现 有快速检测方法结合等不足，建立了猪肉等组织类样品中CLB 的 MISPE-ELISA检测联用技术，可替代现有的常规分析技术，确保检测灵 敏度能够满足现有国家标准（GB/T5009.192-2003 ）的限量要求（0.5 µg/kg ）。更重要的是，该研究对于食品安全领域中其它违禁药物等小分 子物质MIPs 的制备和应用提供了一种有益的尝试和参考。 关键词：盐酸克伦特罗，分子