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摘要
目的构建免疫毒素——蜂毒肽与变构人白细胞介素.2融合基因的原核表达质
粒;并通过对其诱导表达而探讨其对宿主菌E.coll.生长的影响,筛选稳定表达宿主
菌株,表达发酵,目的蛋白定位分析;对可溶部分进行纯化,得到目的蛋白;研究
经Nco
不同时间宿主菌的OD600值并绘制生长曲线及对诱导不同时间的宿主菌进行活菌计
数;28℃,lmM
化,BCA法进行融合蛋白浓度测定。用液相测定法研究融合蛋白的抑菌活性,用
MTr法研究融合蛋白对外周血单个核细胞增殖和对Hela细胞生长抑制的作用。利
用方差分析处理数据。结果目的片段长542bp,测序分析重组子如预期突变,无缺
失、插入及框移;ELISA检测到目的蛋白表达。重组子诱导表达两小时宿主菌OD600
有表达;对可溶部分初步纯化后,每升菌液可得融合蛋白62/比g。纯化后的融合蛋白
抑菌率呈浓度依赖性;对外周血单个核细胞增殖作用与IL-2的差异不具有显著性(P
杀伤作用,质粒丢失情况严重;筛选出变异的耐受宿主菌株,可以进行稳定表达;
对表达产物的可溶部分进行纯化,得到了M.IL-2(踯Arg)免疫毒素融合蛋白;该免
疫毒素融合蛋白具有抗菌、增强免疫功和抑制恶性肿瘤细胞增殖等良好的体外生物
学活性。
硕士研究生 郑旭(病原生物学专业)
导 师 王斌教授
关键词:免疫毒素;蜂毒肽;白细胞介素一2;原核表达;活性
Abstract
construct
To vector it.
Objective expression identify
Screenhostcellswherethe can
target induction,
gene expressstably,followedby
and
determination.Thenactivitiesoftherecombinantin
purification investigate protein
vitro.Methods the mutant
Using
pGEX一4T-2/Melittin-IL-2(8sArg)astemplate,a
obtainedPCR
Melittin.IL-2(8SArg,125Ala)Wasby point
constructed
125Ala)was byligationpET.32a(+)and
NcoI and followedtheT-A constructWas
digestedby HindlIl,which cloning.The
withDNA
identified WasrunwhentheconstructWastransformed
sequencing.Induction
to thetotal Was ELISA.The ofhost
BL21(DE3),andproteinanalyzedby growthcurve
celldrew hostcellsWasdeterminedonthemed
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