禽流感病毒(H9N2亚型，HL株)和国内部分省禽流感病毒(H9亚型)流行株抗原相关性及交互免疫的研究.pdfVIP

获奖论文 35 禽流感病毒(H9N2亚型，HL株)与国内部分省禽流感病毒 (H9亚型)流行株抗原相关性及交互免疫的研究 孙进忠。 荣骏弓 刘守川 乔荣岑 (洛阳普莱柯生物工程有限公司 河南洛阳471000) 亚型禽流感病毒与2005年以后从我国部分省份分离到的6株H9N2亚型禽流感毒株，就毒力、免疫原性和HA基因的变异 等方面进行了比较，旨在为生产用毒种的选择提供理论依据。结果表明，皿株和2005年以后从其他几个省份分离的毒株 有很好的免疫交叉保护性，能够对当前的流行毒株提供足够的抵抗力。 关键词：H9N2亚型禽流感；免疫原性；交互免疫 禽流感(AvianInfluence，舢)是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的禽类(家禽或野禽，亦 有部分哺乳动物)感染和／或疾病综合征【l引。目前我国禽流感的流行以低致病性禽流感H9N2亚型为主 型，占禽流感阳性鸡群总数的93．89％。禽流感病毒变异迅速，近年来的研究表明，病毒表面血凝素(HA) 突变导致邻近链HA的裂解位点上的碱性氨基酸成为优势氨基酸，后者与毒力的增强有关。HA受体结合 位点的氨基酸可以影响受体结合特性，从而改变对病毒与细胞亲和力及宿主范围。这可能就是H9N2亚 型禽流感病毒毒力变异和感染谱不断扩大的真正原因。本试验研究了禽流感病毒(H9亚型，HL株)与 2005年后从我国部分省分离到的禽流感病毒(H9亚型)流行株的抗原相关性及交互免疫原性，为有效的 防制H9N2亚型禽流感提供了科学依据，现报告如下。 1材料与方法 1．1 材料 1．1．1病毒 七株禽流感病毒HL株、GD株、JS株、sx株、HB株、儿株、HN株，均由洛阳普莱柯生物工程有限公司、 河南农业大学采集并分离鉴定。 ， 1．1．2SPF种蛋及SPF鸡： 购自梅里亚微通实验动物技术有限公司。 1．2方法 1．2．17个毒株的毒力(EID∞)测定 将7个毒株的病毒鸡胚液用灭菌PBS(0．01mollL pH7．2下同)做10倍系列稀释，取10一、10～、10一、 照蛋3。4次，及时取出死胚，置2—8。C冷藏保存。观察5d后，全部取出2—8℃冷却12h，逐胚收取尿囊 的E砜。 ·作者简介：孙进忠(1965一)，男。高级兽医师，Tel：0379E-mail：pulikesjz@163．oatrl。 36 20∞学术年会 1。2。2交叉免疫绦护试验 《1)兔疫用疫蓠的制备 将7个毒株在SPF鸡殛上繁建后收获璃胚渡，按“鸡薪城疫病毒(LaSota株)、传染牲支气管炎病毒 灭活苗，梭验合格后备用。 《2；受痰与玫毒方法 试验1；用制备好的禽流感癍毒(辩难型，IIL株)灭活蓊瑕部皮下注射免疫然嚣龄SPF鸡粥熙， 弘檬、联檬l：10稀释麓毒种进行静辣注射，每是鹆0。2mL，在受篷隔离器审餐养溉察。攻毒瑟髓采集瀵 戆腔棉拭予，进行癜簿分离。每只鸡的祥蕊壤囊黢接种10d龄SPF鸡骚5投，蕊察鲥，无论死瓤、活殛均虚 测定鸡胚液皿凝价，以5枚鸡胚巾至少有l枚鸡胚的鸡胚液的斑凝价HA》l：16(微量法)判为感染。对病 毒感染秀瞬性的鸡骚，应言传I代，孬次测定HA效价。 SPF鸡，21d用HL株l：10稀释的毒种进行静脉攻毒其余方法同试验1。 {．2。3交叉斑凝簿裁试验《曛》 将上述免疫鸡群免疫后21d采盘分离的血清，用了个病毒株的抗原分别进行抗体检测。擞据试验所 得的Hl效价，计算鞭相关指数r，r按免疫学方法进行：r=／而，rl；异源血清，／同源血清；，您=异源 斑涛，／隧源巍清，潜j。 1．2。4HA基因编码区核苷酸垒序列的分析与比较 《1》7个毒株的巍凝素{Hemagglutinin。姒》基因的获碍： 采孀RT—PCR的方法获褥|_4j。PCR反应体系隽：10×PCR PCR 引物1皿；下游引物lgL；eDNA模板12ttL；超纯水29．5ttL；0．5t,-L(5．0HighFidelity