外循环气升式生物反应器中固定化微生物细胞发酵生产酯酶研究.pdfVIP

外循环气升式生物反应器中固定化微生物细胞 发酵生产酯酶的研究 * 汪钊 陈小龙 郑裕国 章银军 沈雪亮 （浙江工业大学生物与环境工程学院 杭州 310014 ） 摘 要 在外循环气升式生物反应器（工作体积10 L，高径比2.9 ）中，采用直径为2-3 mm 的无细胞颗粒 代替固定化细胞，模拟通常的发酵状态，考察颗粒浓度对氧传递、循环液速和气含率等参数的影响，确定 多相反应器中适宜的固含率。进一步对固定化根霉（Rhizopus sp. F-16 ）细胞在外循环气升式生物反应器中 的发酵性能进行了研究，确立其最适通气量为1.3 vvm，最适装液量为8.75 L，发酵48 h 时固定化细胞生成 的酯酶活力达41.6 U/g 细胞。该研究结果对于微生物在低高径比气升式生物反应器中发酵生产酯酶的工艺 优化具有重要意义。 关键词 酯酶 固定化细胞 外循环气升式生物反应器 发酵 引 言 微生物酯酶（Esterase ，EC ）是重要的工业酶类，广泛应用于食品工业、医药行 业、日用化工业、军事业和生物防护等领域，可催化酯合成、内酯合成、酯交换、多肽合成 等众多反应，而且其中的大多数反应具有不对称选择性，可以专一性地用于制备许多利用化 学法难以合成的手性化合物（如液晶、光学活性药物、农药等）及其前体[1，2] 。酯酶催化 的反应还具有反应条件温和、反应介质地选择性大、产物分离纯化容易、酶本身易于回收等 优点，因此，与酯酶有关的课题成为当今应用酶学研究的热点之一。随着科技的快速发展， 微生物酯酶的应用领域将越来越广泛。 气升式生物反应器是利用含气体流体与不含气体流体的静压差推动流体循环的一种反 应器，由于其与机械搅拌式生物反应器相比，具有设计构造简单、操作简便、不易染菌、剪 切力小、质量和热量传递较快以及能耗较低等优点，因而受到了广泛地关注。目前研究较多 的是高径比大于5.0 的气升式生物反应器[3，4] ，而本实验室自制的外循环气升式生物反应 器高径比小于 3.0，有关其动力学和氧传递性能，除本实验室之前的研究报道[5-7]外，国内 外尚无同类报道。对于高径比小于3.0 的气升式生物反应器的研究，不仅使那些不易在机械 搅拌式生物反应器中进行发酵的微生物有了更适宜的培养环境，而且为现有的高径比小于 3.0 的机械搅拌式生物反应器的改型翻新带来可能。 本文采用根霉（Rhizopus sp. F-16 ）在外循环气升式生物反应器中发酵生产酯酶。由于 根霉的菌丝比较发达，在发酵过程中容易纠结成团，从而增加了传质阻力和动力消耗，所以 本文采用海藻酸钙凝胶包埋固定根霉细胞。为优化固定化细胞在外循环气升式生物反应器中 的发酵条件，需要了解颗粒浓度对反应器主要参数的影响。本实验以空气作为气相，羧甲基 * 通讯联系人：汪钊 E-mail 地址：hzwangzhao@163.com 电话号码：0571 1 纤维素钠（CMC ）水溶液作为液相，采用直径为2-3 mm 的无细胞颗粒模拟固定化细胞作为 固相，并以空气-水体系作为基准进行比较。实验条件模拟通常的发酵状态，在通气量、装 料量、罐压和料液浓度等条件已确定的情况下，考察颗粒浓度对氧传递、循环液速和气含率 等的影响，并进一步对固定化细胞在气升式生物反应器中的发酵性能进行了研究。该研究结 果对于优化微生物酯酶的生产工艺具有重要意义。 1 材料和方法 1.1 菌株 产酯酶微生物根霉（Rhizopus sp. F-16 ），由浙江工业大学生物工程研究所从土壤中筛选 并保存。 1.2 培养基 1.2.1 斜面培养基 马铃薯20% ，葡萄糖2% ，琼脂2% ，pH 自然。 1.2.2 增殖培养基 葡萄糖0.5% ，蔗糖0.5% ，玉米浆0.2%，酵母膏0.5% ，K HPO 0.2% ， 2 4 MgSO ·7H O 0.1% ，pH 自然。 4 2 1.2.3 发酵培养基 葡萄糖2% ，蔗糖1%，蛋白胨2% ，尿素0.3% ，NaCl 0.5% ，K2HPO4 0.2% ，