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第三届全国环境化学学术大会论文集 B-08 微生物挥发砷影响因素研究 吴 剑，杨柳燕，肖 琳 污染控制与资源化研究国家重点实验室，南京大学环境学院，南京，210093 关键词：砷，生物挥发，芽孢杆菌，二甲基砷酸盐，浓度，pH，气态砷 分类：土壤污染及修复 1 引言 生物挥发(Biovolatilization)就是利用生物的作用，包括植物和微生物的作用，把土壤中 的金属转化为甲基化有机金属，由于后者的沸点比较低，很容易挥发而进入到大气中，从而 达到降低土壤中金属含量的目的。对于土壤中的砷，人们早就发现具有生物挥发的现象，无 机的砷酸盐，亚砷酸盐等，在一定的环境条件下，通过微生物的作用下，转化为一甲基砷， 二甲基砷和三甲基砷，由于它们的沸点都比无机砷要低得多，从而能挥发到大气中，因此， 采用生物挥发技术修复土壤砷污染可能也是一个可行的技术。本研究分离到一株能挥发砷的 细菌，分析环境条件对其砷生物挥发的影响。 2 试验方法 取高浓度砷污染地区土壤，进行细菌的富集培养，通过平板分离后得到单菌落，然后 在含砷的培养基上进行培养，筛选得到能挥发砷的菌株，然后进行挥发能力的测定。 对筛选得到的能挥发砷的细菌采用 16R rRNA 寡核苷酸序列分析进行菌种鉴定，提取 细菌 DNA ，以FD1 和 RP2 为引物，对 16S rDNA 序列进行 PCR 扩增，PCR 产物测序，与 Genbank 中的核酸数据进行比对分析。 3 结果和讨论 通过大量的筛选得到一株能挥发砷的菌株，当含砷的底物为二甲基砷酸盐时，转化二甲 基砷酸盐为气态砷。对筛选到的菌株进行 16R rRNA 寡核苷酸序列分析，鉴定为芽孢杆菌 属（Bacillus sp. ），然后对其挥发能力进行测定，并分析环境条件对生物挥发的影响。 3.1 不同砷化物底物对生物挥发能力的影响 在液体培养基中添加亚砷酸盐和二甲基砷酸盐后，芽孢杆菌对砷的挥发能力见图 1。芽 孢杆菌能挥发二甲基砷酸盐，而不能挥发亚砷酸盐，说明在含砷土壤中可能存在共代谢的方 式对砷的转化发生作用，有的微生物利用亚砷酸盐作为甲基受体，把亚砷酸盐转化为二甲基 砷酸盐，然后再由芽孢杆菌转化为甲基砷。甲基砷挥发到大气中。Cheng 等研究了三种土壤 中两种离体细菌Alealigennes 和 Pseudomonas 在施用四种砷化物后，对生成胂气类产物的作 用情况。其结果表明，无机砷和有机砷在所试验的三种土壤中均可形成砷化氢气体；而且， 在任何一种土壤中都没有发现砷化物的甲基化作用，即甲基胂和二甲基胂都不能从无机砷经 甲基化途径形成，而仅能从相应的甲基砷酸盐形成，与本研究的结果一致。 3.2 不同砷浓度对生物挥发能力的影响 在培养基中添加不同浓度的二甲基砷酸盐，观察二甲基砷酸盐浓度对假单胞菌生物挥发 砷能力的影响（图 2 ）。培养基中二甲基砷酸盐的浓度越高，砷生物挥发能力越强，这符合 微生物代谢的一般规律，底物的浓度越高，代谢的数量越大，但是，由于微生物的催化的砷 酸盐还原，常常呈现可逆性，生物挥发砷含量与培养基中二基金砷酸盐浓度不成线性关系。 国家自然科学基金（B070203 ）资助项目 Ⅱ-12 第三届全国环境化学学术大会论文集 1 700 0.8 g 500 ） n g 0.6 ， u 量 （ 发 300 量 0.4