局部低温灌洗对继发性脊髓损伤保护作用实验研究.pdfVIP

中文摘要 局部低温灌洗对继发性脊髓损伤保护作用的 实验研究 摘 要 目的：通过研究兔急性脊髓损伤经局5H2．Ijf氐温灌沈治疗后 伤段脊髓组织水及钙离子含量的变化，组织病理学和超微结 构的改变，单位面积凋亡的细胞个数及伤后脊髓神经功能的 恢复情况，来探讨局部低温灌洗对继发性脊髓损伤保护作用 的机制，寻求一种治疗继发性脊髓损伤的新方法，改善脊髓 损伤患者的预后。 方法：选健康新西兰大白兔36只，随机分为3组，每 组l2只，A组：正常对照组；B组：脊髓损伤组；C组：脊 静脉注射麻醉，常规消毒铡单，显露T。2～L2棘突及椎板，切 除棘突及椎板，显露硬膜。A组显露硬膜20min后缝合伤口； B、C组：按改良的Allen’S重物打击法制备急性脊髓损伤模 型，打击强度为35×1 ld 合伤口。各组动物分别于术后6h、24h、3d、7d、25个时 问段观察兔的双后肢肌力，行Tarlov评分。各组分别在6h、 24h、7d、21d 4个时间段随机拙取3只动物，麻醉下切取以 打击处为中心的脊髓组织长约2cm，于伤髓中心处切取一大 小约0．1×O．1×0．1 cm3的组织，用4％戊二醛固定做透射电镜标 本，在日立H一7500透射电镜下观察伤髓的细胞形态。将剩 余标本从中间分成两半，一半用lO％多聚甲醛固定24h后， 中文摘要 常规HE染色，光镜下观察伤髓的组织学形态改变。另一半 作水、钙含量测定。在各个时间段的每只兔标本切片中随机 抽取一张切片，参考相关实验技术作TUNEL染色，每张切 片背角区任选5个视野，测定单位面积(1mm2)内凋亡细胞数。 数据均以均数±标准差(i±s)表示，采用SAS6．12统计软件 进行结果分析，Yarlov评分的比较用多个样本两两比较的秩 和检验进行统计学分析处理，水、钙含量和凋亡细胞数的比 较用单因素方差分析和q检验进行统计学分析处理。 评分均低于C组(PO．05)。②含水、钙量：B、C组伤段脊髓 在各损伤时间段内含水、钙量均高于A组(PO．05)，B组伤段 脊髓在各损伤时间段内含水、钙量均高于C组伊O．05)；B 组水、钙含量于7d时仍继续升高，而C组已开始呈下降趋 势。③光镜HE染色可见A组脊髓组织灰、白质边界清楚， 神经元髓鞘结构正常；B组伤段脊髓组织灰、白质边界不清， 可见大片状出血、水肿、坏死区，灰质中神经元减少，部分 尼氏小体及细胞核消失，白质呈网状脱髓鞘改变；C组伤段 脊髓组织出血、水肿、脱髓鞘改变明显轻于B组。@TUNEL 法测定细胞凋亡：A组各时间段均未见明显的凋亡细胞；B 组伤段脊髓在各时间段均可见大量的凋亡细胞，C组伤段脊 髓在各时间段的凋亡细胞数又明显少于B组(PO．05)。⑤透 射电镜观察：A组细胞及细胞器的超微结构清晰，未见明显 异常：B组伤段脊髓灰质内神经细胞核不完整，核膜模糊、 变形，核仁内有空泡形成，线粒体肿胀，嵴大部分融合成均 质物质，数量减少，内质网扩张，核糖体减少，髓鞘板层结 中文摘要 构紊乱，扭曲变形，板层问水肿严重，排列疏松，髓索水肿 l!Jj显，结构彳≮消晰，微丝数量显著减少，细胞器结构的损害 随时问进行性加重；C组伤段脊髓在各时间段内的细胞及细 胞器结构破坏明显轻于B组，细胞核尚完整，细胞器变性改 变轻，后索髓鞘板层结构尚存，轴索内可见肿胀的线粒体及 微丝、微管，细胞器结构的损害随时问逐渐减轻，21d时髓 鞘、髓索病变轻微，仅局部轻度增生、水肿，线粒体部分空 泡化，微丝数量轻度减少。 结论：本实验通过冰冻盐水局部灌洗治疗急性脊髓损 伤，发现低温灌洗组伤段脊髓较单纯脊髓损伤组水、钙含量 降低，病理组织学和超微结构破坏减轻，细胞凋亡数减少， 后肢的神经功能恢复增强。这些结果表明：局部低温灌沈可 降低脊髓神经细胞的能量代谢，减轻细胞水肿，稳定细胞膜； 减少Ca2+内流，阻断Ca2+对神经细胞的毒性作用；抑制神经 细胞的凋亡；抑制兴奋性氨基酸的释放，减少自由基的产生， 抑制炎症反应，从而最大程度上保护受损的脊髓组织，