大鼠脑β-淀粉样蛋白生成和胆固醇水平关系研究.pdf

中文摘要 大鼠脑B一淀粉样蛋白生成与胆固醇水平 关系的研究 摘 要 目的：阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)是一种 中枢神经系统退行性疾病。主要病理特征是患者脑内出现以 p．淀粉样蛋白(p．锄yloidpeptide，Ap)为主要成分的老年斑， 细胞内神经纤维缠绕，广泛的神经元的减少或丢失。一般认 为AD的生成增加及其在脑内沉积是该病发生发展的关键因 素。引起Ap生成增加的因素是多方面的。研究表明，Ap沉 积与体内高胆固醇水平有关。体外培养细胞和整体实验均证 实胆固醇与Ap的生成之间存在着密不可分的关系，高胆固 醇是AD发病的危险因素【l2】。 体内各组织(包括脑)均可合成胆固醇，其合成的限速 CoA glutarylreductase，|玎ⅥG．CoA 药物是}ⅡⅥG．CoA还原酶的抑制剂，能抑制胆固醇的合成， 近年来已广泛用于高胆固醇血症的治疗。脑内大部分胆固醇 是由神经元细胞内胆固醇一24S一羟化酶(CYP46)将其转化 为24S一羟基一胆固醇后通过血脑屏障出脑【3】，也有一部分脑 胆固醇可能是由脑D一双功能蛋白催化生成24R一羟基一胆固 醇后出脑f41。胆固醇主要通过在肝内代谢生成胆汁酸排出体 外。 轻度的AD病人服用辛伐他汀后，脑脊液中Ap40和 Ap42水平下降【5】；在用他汀类药物降血胆固醇的人群中， 中文摘要 AD的发病率也有所下降【4】。用他汀降低细胞内胆固醇水平， 原代培养的海马神经元和混合性皮质神经元细胞内、外的． Ap40和Ap42水平也随之降低【6l。给予豚鼠高剂量的脂溶性 的辛伐他汀，血胆固醇显著降低，此时虽然脑胆固醇含量不 precursor 著降低【71。我室以前的实验【8】发现，给予大鼠高胆固醇饮食， 血胆固醇显著升高，虽然脑胆固醇含量不变，但脑AD含量 明显增高。整体水平，脑Ap生成是与血胆固醇还是与脑胆 固醇的含量有关?值得探讨。 本实验中，我们给予SD大鼠不能通过血脑屏障的水溶 活性，降低血胆固醇，来观察脑组织内胆固醇代谢及胆固醇 量与Ap生成的关系，来探讨Ap与血、脑胆固醇水平的关 系，为AD治疗提供新的实验依据。 方法 1动物分组及取材 20只，随机分为：①对照组(Con组)10只；②氟伐他汀组 (FV组)10只。每天给予氟伐他汀组大鼠来适可(主要成 t 分是氟伐他汀)20mg／l(∥day灌胃，对照组给予不含来适可， 其它组分相同的液体灌胃。各组大鼠均自由饮食饮水，连续 灌胃28天后，颈动脉插管取血，血清用于血清胆固醇测定。 迅速取出肝、脑组织置液氮中，于．70℃保存，分别用于总胆 固醇、总mRNA的提取、脑Ap的测定。另外各组均用4％ 多聚甲醛固定部分脑组织用于淀粉样前体蛋白(APP)的免 中文摘要 疫组织化学染色。 2测定指标及方法 2．1血清、肝、脑胆固醇测定 用胆固醇氧化酶一比色法测定。血清胆固醇以mmol／L表 示，肝、脑胆固醇以每g组织中的mg数表示(mg儋)； 2．2IIl】刚A的定量 内参照，应用RT-PCR方法测定脑组织中羟甲基戊二酸单酰 B-actin表示； 2．3脑组织AD的含量 用解放军总医院科技开发中心放免研究所p．AP放免试 剂盒，采用竞争性放射免疫分析法进行测定，Ap量用每毫克 蛋白中p．淀粉样蛋白的皮克数表示(pg／mg)。 2．4脑组织淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白表达量 用免疫组织化学染色方法和图像分析方法，用平均光密 度值表示。 结果 1大鼠血清胆固醇含量的变化 mmol／L) 氟伐他汀组(FV)血清总胆固醇含量(1．13±O．10 氟伐他汀降低了血清中总胆固醇水平。 2大鼠肝胆固醇含量的变化 中文摘要 氟伐他汀组(FV