体积排阻色谱法对还原变性溶菌酶复性研究.pdfVIP

图二酒样色谱圉 (图中A、B、C和D四峰各自成分是 反式白蓥芦醇、顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇苷和顺式白藜芦醇苷) 该色谱分析法．有助于检测葡萄酒中白藜芦醇及其糖苷异构体的含量，并有随时监测葡萄酒生 产过程中自藜芦醇相关化合物含量变化的潜能。 参考文献； 【1J孙文基、绳金房天然活性成分简明手册．北京；中国医药科技出版社，1998：148， TrelaB．c．，WatechouseA．L．，Resveratrokisomericmolar and 【2】2 absorptivities stabitity．J．A鲥c．Food them．，1996，44(5)：1253—1257． Gehm found B．D．，McAndrews a1．gesveratml,a in 【3l J．M，Cbj朗只Y，et polyphenoliccompound grapesaadwin，isanagoaigfortke estrogen Q ohemo active natural L，Udeani a1．Cancer 【4】JangM．，Cai O．，d preventiveofmsv目atrol，aproduct derivedfrom grapes，Sclenco，1997。275：218-220． 【5】 aI．Khlaseinhibitorsfrom Ga．mihi,S．J．，Biruntht,J．，Eung-Seok．L．，etploygonumcuspidatum．J． NatmalProd’1993，56(10)：1805．1810． P16-122 体积排阻色谱法对还原变性的溶菌酶的复性研究 ‘裴朝玉2方国波。苗会娟，。吕宪禹 周口师范学院化学系，河南省周口市466000 fgbl24@yahoo．eom,cn 2．南开大学生命科学学院，天津300071， }莨相色谱法是近年来发展最快的复性方法之一，与传统的复性方法(稀释法、透析法)相比， 其优点在于利用蛋白质以单分子状态吸附于固定相上．有效的降低了变性蛋白质的局部区域浓度． 避免或减小单个分子间的相互作用，从而达到了抑制聚集，提高活性回收率的目的。同时，在复性 过程中。复性的目标蛋白还可姐与大部分杂蛋白进行分离一实现了蛋白复性与纯化同时进行的目的。 体积排阻色谱法是液相色谱中较为常用的一种蛋白质分离及纯化方法，其基本原理是利用蛋白质分 子大小及形状进行分离的，同其它液相色谱不同，变性蛋白质不与体积排阻色谱固定相之间发生吸 附作用．只是通过去除变性蛋白质溶液中的变性剂，降低蛋白质浓度来促进蛋白质重折叠，仅仅是 有利于更换变性复性蛋白质的缓冲溶液，几乎不涉及到二硫键正确对接的问题111．还原变性的蛋白 ·30· 质复性是一个比较复杂的问题，其中最关键的涉及到二硫键的正确对接。溶菌酶有4对二硫键，复 性难度大，目前已经成为评估一个新的复性方法的标准。蛋白质复性环境接近蛋白质体内所处环境 更加有利于蛋白质复性，还原变性的溶菌酶其二硫键完全打开，天然二硫键的形成是在一种还原的 气氛中进行的，因此，还原变性的蛋白质常采用氧化还原平衡体系环境中进行复性“1。另外，二硫 键的形成是在弱碱性条件下进行的”1，因此，还原变性蛋白质的体外复性适合在弱碱性的氧化还