索拉非尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株作用研究.pdfVIP

第二届“CSCO一南方”肿瘤生物治疗与分子靶向治疗论坛 附和细胞间信号转导的作用。 步阐明了ATRA在体外抑制肝癌转移的分子机制，为ATRA在临床上用于肝癌的治疗打下理论基础。 索拉非尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株作用的研究 张华1一，罗荣城¨，伍婧1。崔彦芝’，陈逢生’，李爱民1(1南方医科大学附属南方医院肿瘤中心。广州510515；2广东省人民医 院肿瘤内科。广州510080) ■耍：目的：检测索拉非尼fSorafenib)单药、三氯化二砷(Arsenictrioxide，As203l单药以及两药联合对肝癌细胞株Hep62的作用．探讨两药联 4-As20，联合用药组．另设不加药的对照组．作用 用的协同抗肿瘤机制。方法：以不同浓度的SorafenibL和不同浓度的As203分别组成单药组和Sorafenib 0．05loSorafenib、As20，单药与联用均能诱导HepG2细胞凋亡．联合组更为明显(P0．05Jo用药后ERK蛋白裹达无明显改变．而pERK裹达下降． 信号传导通路。 关■词：索拉非尼；三■化=砷；肝癌 目前生物靶向治疗是原发性肝癌的研究热点。有研究表明新生血管的生成和Raf／脏K／Elll(级联的信号传导在肝细胞癌进 管生成的双重作用。三氧化二砷(Arsenic 证实两药联合可以具有协同作用，为进一步的体内试验与I临床应用提供理论依据。 1材料与方法 1．1细胞与试剂 Sorafenib购自拜尔公司，三氧化二砷为哈尔滨伊达药业有限公司生产。AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒、罗丹明 123染色试剂盒均购自南京凯基生物发展有限公司。人肝癌HepG2细胞株引自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库． 1．2细胞培养 HepG2细胞在37℃、5％的C晚孵箱中培养，培养基为含10％灭活小牛血清的RPgI1640，含1％的双抗(青霉素和链霉素)． 细胞为上皮样细胞，每2～3d传代1次，并取对数生长期的细胞用于实验。 1．3 MTF法检测药物对肿瘤细胞增殖的抑制 6、3、1．5 取对数生长期HepG2细胞，以5×10y孔的密度接种于96孔板，培养24h后加入药物。实验分组：Sorafenib II IImol／L和As2034、2 每个剂量设5个复孔，加药后分别培养24、48、72h后每孔加入l盯T(5mg／m1)10lIL。继续培养4h。终止培养，弃上清，每 孔加150ul nm)测定各孔的oD值，计算细胞增殖抑制率。抑制率 DMS0，振荡lO分钟，使结晶物充分融解，用酶标仪(波长570 (％)=(对照组oD值一实验组0D值)／对照组0D值×100％。 h后加入药物．实验分组为单药 1．4流式细胞仪检测细胞周期及凋亡取对数生长期HepG2细胞接种于6孔板，培养24 ll 4u 3lI 4IJ Sorafenib3 mol／L，单药As203mol／L和联合用药组Sorafenibmmol／L+As203mmol几，另设不加药的对照 组。加药后12h分别收集细胞，调整细胞浓度为5×10s／m1，分别行细胞周期及凋亡检测：(1)周期检测g75％乙醇一20℃固定过 PI500p 夜，洗涤离心后加入含有0．1％RnaseA的PBS液和10IJg／ml l，室温避光染色30rain后上流式细胞仪(美国， II 1 Annexin lI V-FITC和51的PI，避光室温反应15min，上机 B．D．Vantage型)进行细胞周期测定：(2)凋亡检测：加入10 检测。数据均由idodFit2．O软件系统分析． 1．5 Western．Blot检测ERK、pERK、BCL-2、MCL-1表达 童讯作者：罗荣城