生物杀虫剂——昆虫病原线虫的研究与其产业化.pdfVIP

植物保护科技创新与发展 生物杀虫剂——昆虫病原线虫的研究及其产业化+ 韩日畴1 田彩娟2 张鹏波3 陈镜华1 丘雪红1 曹 莉1 王立婷2 (1广东省昆虫研究所，广州510260；2中国科学院华南植物园，广州510650； 3中山大学生命科学学院，广州510275) 摘要：本文描述生物杀虫荆一昆虫病原线虫培养技术的发展过程，培养程序和未来的 展望。同时，介绍中国昆虫病原线虫的产业化进展，特别是广东省昆虫研究所的产业化之路。 关键词：昆虫病原线虫；生物杀虫剂；离体培养；产业化 在人类跨入21世纪之际，可持续发展已成为国际社会关注的主题。应用自然控制方 法管理病虫害，消除化学农药对人类食品和环境的严重污染是实现可持续发展的主要途 径。研制新型、高效生物农药已列为“中国二十一世纪议程”优先发展项目之一。 剂在防治多种农林、草地、花卉以及卫生害虫方面发挥了独特的作用。在工业化国家的生 物农药市场中，此类线虫的市场销售额仅次于苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)，占 第二位。这类线虫具有独特的优点：广泛的寄主范围；对寄主具主动搜寻能力，特别是对 土栖性及钻蛀性害虫；可规模化培养，使用方便；对人畜、环境安全，特别是目前世界上 大多数国家和政府豁免注册可以生产、施放。 昆虫病原线虫的产业化需要有效的培养方法。线虫的培养方法已从活体培养发展到离 体培养；离体培养又从无菌培养到单菌培养。昆虫病原线虫的单菌培养是在明确共生细菌 的营养作用的基础上，通过无菌操作技术于人工培养基中加入共生细菌和线虫而建立的， 即线虫的单菌体外培养系统。根据培养基的基质可分为固体(solid phase)培养。液体培养系统中，控制共生细菌的菌体密度、菌型，筛选合适的培养基， 线虫种的制备方式，线虫发育的同步性，发酵参数控制，以及产品的后处理方法均影响产 品的产量、质量和培养成本。 广东省昆虫研究所在昆虫病原线虫研究和产业化过程做出了努力，也取得了一系列令 国内外同行关注的进展。 1 昆虫病原线虫及其共生细菌种质资源库建设 生物杀虫剂对国家来说是战略资源，不仅作为研究材料，而且具有商业价值。因此我 们从国内外收集了大量昆虫病原线虫，构建了国内最大的生物杀虫剂一昆虫病原线虫和共 生细菌的种质资源库。 研究综述 2 昆虫病原线虫的分类研究 昆虫病原线虫斯氏属和异小杆属的分类鉴定‘2}。 3 昆虫病原线虫共生细菌的研究 3．1分离和测定了两型共生细菌(初生型和次生型)的形态、抗菌性、生理生化特征以 及对昆虫病原线虫培养的影响【3。J。 3．2测定了不同Xenorhabdus菌株培养物的游离氨基酸含量∞J。 3．3共生细菌菌株的噬菌体检测’7o。 3。4共生细菌菌株对小菜蛾(PluteUaxylostella)的趋避作用¨q1。 3．5 昆虫病原线虫与共生细菌的共生关系研究 4共生细菌对非自然共生昆虫病原线虫的毒杀作用 4．1 测定了不同Photorhabdus 养的专化性、繁殖性能、感染期线虫的携菌能力¨¨”J。 H06和S．carpocapsae 4．2测定了无菌It．bacteriophora mellonella)中的生长、繁殖和对无菌大蜡螟的毒性¨2|。 4．3 昆虫病原线虫与共生细菌和非共生细菌的食物信息专化性¨2’“J。 当昆虫病原线虫与不同的共生细菌菌株组合培养时，有些共生细菌菌株对非自然共生 的线虫产生致死作用。无菌的14．bacteriophora P．1uminescens LN2共生细菌组合培养时，LN2共生细菌产生的对热敏感的毒素可致死H06 线虫㈨。 5证明共生细菌晶体蛋白的营养功能 构建了两株携带胞内晶体蛋白编码基因c蝉、c咖B的重组大肠杆菌，并建立了重组细 菌一线虫液体及固体共培养体系，对线虫的生长发育及繁殖状态进行了研究。结果显示： 共生细菌的胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫具有营养功能，并证明这种蛋白与感染期线虫的 形成直接相关；采用构建重组酿酒酵母的方法研究胞内晶体蛋白的生物学功能时发现了胞 内晶体蛋白对Panagrellusredivivus线虫的特定的生物学作用‘坫1。 6共生细菌口服毒素基因的表达和应用