RAPD在真菌分类鉴定上的应用.pdfVIP

维普资讯 仲恺农业技术学院学报 ，16(1)：61～67，2003 JournalofZhongl~ 4 College 文章编号 ：1006—0774(20o3)01—0061—07 RAPD在真菌分类鉴定上 的应用 李敏慧 ，向梅梅 ， ，姜子德 (1．华南农业大学资源环境学院，广东 广州 510642； 2．仲恺农业技术学院植保 系，广东 广州 510225) 摘要 ：对 RAPD的原理和特点及其 近年来在真菌分类鉴定上的应用进行 了综述 ，内容涉及 RAPD 在真菌种间 、种 内，以及种 以下分类单元 的分类鉴定、疑难种的鉴定和个别菌株的鉴定上的研究 进展 ，并列举了代表性的应用实例 ，同时对 RAPD在真菌分类鉴定上应用 的可行性及其在 该研 究领域 中的广 阔前景进行 了展望 ， 关键词 ：RAPD；真菌；分类鉴定 中图分类号 ：$4324 文献标识码 ：A 长期 以来 ，真菌的分类鉴定一直 以形态学性状为主要依据 ，而这些形态学性状 由于难 以 观察、或在人工培养条件下很难产孢而观察不到、或者本身形态特征相近很难区分，以及易 受环境条件的影响而不稳定等原因，给真菌的分类鉴定，尤其是种及种 以下的分类鉴定带来 了一定 的难度… ． 现代分子生物学技术的发展及其在真菌分类鉴定上的应用 ，为人们从分子水平上分析 真菌不 同分类单元之 间的差异和亲缘关系提供 了有力 的手段 ．目前用得较多的是 限制性片 段长度多态性 (Restrictionfragmentlengthpolymorphism，R~LP)、随机扩增多态性 DNA (Random AmplifiedPolymorphicDNA，RAPD)、DNA扩增片段长度多态性 (Amplifiedfragmentlengthpoly． morphism，AFIP)和 内部转录间隔区 (InternalTranscribedSpacer，ITS)序列分析技术_1．3J，其 中 RAPD以其所具有的操作简便、速度快、安全 (不需要 同位素标记)、经济 以及仅需要微量模板 DNA等优点而深受重视 ． 据不完全统计 ，RAPD 已在链格 孢属 (Alternaria)，葡萄孢属 (Botrytis)，发癣 菌属 (Tn- chophyton)，芽枝霉属 (Cladosporium)，炭疽菌属 (Colletotrichum)，顶囊壳属 (Gaeumannomyces)， 组织孢浆菌属 (Histoplasma)，球腔菌属 (Mycosphaerella)，茎点霉属 (Phoma)，侧耳属 (Pleuro． tus)，丝核菌属(Rhizoctonia)，腥黑粉菌属(Tilletia)等 50余个属的种类区分或疑难种鉴定上得 到应用_4 51．而且 ，新 的研究资料仍在增加 ，研究范围也在不断拓展 ．尽管 已有学者对分子 生物学技术在真菌分类鉴定 的应用进行 了综述_l一3j，但 RAPD在这方面 的应用 只是其 中 的一部分 内容 ，而且也不系统 ，为能将 RAPD技术更好地应用到真菌分类鉴定研究的实际工 作 中，有必要对前人 的工作进行更全面 的理解和系统 的总结 ． 收稿 日期 ；2002—05—21 作者简介：李敏慧 (1 一)，女．内蒙古集宁人 ，在读硕士研究生．*通讯作者 ． 维普资讯 仲恺农业技术学院学报 第 16卷 1 RAPD的原理及特点 1．1 原理 由Williams等 [16]和 we 等 ”【J于 1990年建立的tLatPD是一种有效的遗传标记技术，现 已广泛应用于动植物及微生物的遗传变异、分子进化和基因组研究等领域 ．该技术是在PCR 技术基础上，利用一系列不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸链 (通常为 lObp)为引物 ， 在 DNA聚合酶的催化下 ，以dNTP为原料 ，对所研究基因组 DNA进行 P( 扩增 ．所得扩增产 物通过聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶 电泳分离，EB染色后置于紫外灯光下检测其多态性 【18J．