奶牛体外成熟卵母细胞和X分离冻精体外受精研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五届全体会议第十次学术研讨会论文集 奶牛体外成熟卵母细胞与X分离冻精 体外受精研究 马保华”，刘闯。徐红强．赵晓娥 (西北农林科技大学动物医学院动物生殖生理和胚胎工控重点，F放实验宣．抉西杨；夔712100) 摘要：比较x分离冻精和未分离冻精与牛卵母细胞进行体外受精后，受精卵的卵裂率和胚胎发育率。X分离冻 精组受精卵的卵裂辜(51 上浮非离心法处理两种槽子后，其受槠卵的卵裂率(65．5％，50．7％)高于上浮离心法处理组(63．8％．48．3％)． 但无统计学差异(P)0．05)；同一种精于采用微量上浮非离心法或上浮离心法处理后，其卵裂胚的桑葚胚发育率和 囊胚发育牢无统计学差异(PO．05){x分离冻楷的受精卵与颗粒绑胞和睾丸支持细胞共培养后，其卵裂牢(5l_4 ％．50．O％)与非共培养组(503％)无显著差异(Po．05)；两个共培养组的桑葚胚发岢率(54．6％，53．3％) 和囊胚发育率(21．5％，21．I％)均高于对照组(52．2％，20 4％)，但无统计学差异(PO．05)。 关键词：X分离冻楷；共培养；胚胎；体外受精；奶牛 在奶牛业繁殖育种中t自然条件下所生产犊牛性别比例为I：I．但只有雌性犊牛才具有生产意义， 而雄性犊牛的生产意义不大，因而在一定程度上降低了奶牛业的经济效益。20世纪80年代中期以后， 以牛为代表的家畜体外受精(invitro 代出生(Brackettet al，1982)。随着流式细胞仪的发明与应用，以及以DNA作为性别选择的一种潜在标 Seidel，208)。在目前的精子性别分离研究与应用中，现有的精子性别分离技术的分离速度较慢，所以每 份性别分离冻精的有效精子数一般只有200万左右而且性别分离操作会在一定程度上降低精子活力。 et 如采用常规人工授精．妊娠率仅有15％-50％(Xual，2009)，而且消耗的冻精细管数量(2．3支)也较 et 右的精子就可使一个卵母细胞受精(Yangal，1993)．与人工授精柏比较较为经济。因此．将性别分离 精子应用于IVF且与胚胎移植技术相结合，将会较大限度地提高性别分离精子的应用价值，促进奶牛业 的发展。然而性别分离精子在分离过程中受到高倍稀释、分离压力、核荧光染色和激光照射等因素的影 et et 响，其体外受精效率和胚胎发育率总体上比较低(Suhal，2005；陆阳清等，2004；Sartori al，2004)。 如何提高性别分离槽子的体外受精率和受精卵的体外发育率是性别分离精子应用研究的技术基础，本研 究的目的一方面是通过改进精子获能处理方法来提高牛x分离冻精体外受精率．另一方面利用睾丸支持 细胞和颗粒细胞与体外受精卵共士i=}养以提高性控胚胎的体外发育率。 1材料和方法 1．1主要试剂、操作液和培养液 品；尿促性素(HMG)，171Y雌二醇(B)由丽珠医药集团股份有限公司生产；除上述特别指明的试剂 外．其他试剂均为美国Sigma公司产品。 20“6KZO?一GI)资助 基金I五日：863计划现代农业技术项目(2008AMO]00=}．20C8A^101003)．陕晒省重大科技攻关砸且(ML educn ··通讯作者：马保华．救授．主要从事动物细胞与胚胎工程研究．E-mail哪hh目n-suaf 8 中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第五Ji『：全体会议第十次学术研讨会论文集 卵母细胞及胚胎操作液：含5％新生牛血清的政趄杜氏磷酸盐缓冲液(mDPBS+5％NCS)。 05 酮酸钠+O．21mmol／L谷氩