嗜酸乳杆菌产细菌素生物学特性和临床应用的研究.pdfVIP

细菌病 嗜酸乳杆菌产细菌素生物学特性与临床应用的研究 单春乔刘艳刘秋晨庄国宏· (大连三仪药品有限公司，三仪生物工程研究所，辽宁大连116036) 变，对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌，大肠杆菌为代表的革兰氏阴性茵有明显的抑制作用，在与致病菌 混合培养中40h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌，48h内可以完全消灭大肠杆菌．体外抑菌实验表明嗜酸乳杆菌代谢 产物具有较强的抑茵作用；临床试验表明，细菌素对猪细菌性感染疾病有良好效果． 关键词细菌素、抑茵活性，生物学特性 嗜酸乳杆菌是机体肠道内极其重要的益生菌，具有调节机体肠道微生物菌群的平衡、增强机体 免疫力等一系列作用，其作用机理主要是嗜酸乳杆菌分泌的细菌素发挥抑菌作用，抑菌谱广，能抑 制多种革兰氏阳性、阴性病源菌。近几年国内外学者对细菌素(如nisin)的研究较多，并且技术已 经成熟。 在动物疾病治疗过程中，长期以来一直使用抗生素，尤其是细菌性疾病。本实验旨在探讨采用 细菌素对哺乳动物肠道细菌性疾病进行治疗，寻找一种新的治疗方法。在仔猪、兔子、貂、狐狸、 鹿、貉等动物中使用，能有效地防制由大肠杆菌和沙门氏菌引起的肠道疾病，如仔猪黄、白痢等。 应用细菌素替代抗生素用于肠道细菌性疾病的治疗，减少或消除抗生素在肉、蛋、奶中的残留，为 生产绿色食品提供了有效的手段。细菌素作为饲料添加剂可以防止饲料本身被致病菌污染，防治致 病菌对动物肠道的影响。随着我国饲料工业的发展，畜禽饲料中添加细菌素将会得到更广泛的应用。 本文主要研究了肠道益生菌嗜酸乳杆菌发酵代谢产物细菌素的生物学特性，并对其抗菌活性物质细 菌素进行分析，畜禽用饲料添加剂和疾病的治疗提供理论依据。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1培养基 MRS培养基、LB培养基 1．1．2菌种 由大连三仪生物工程研究所提供，见表1。 表I实验所用菌种 1．13临床试验研究 试验动物：仔猪、母猪 试验场地：唐山市宣庄某养猪场现存栏1500头，基础母猪300头。 1．2方法 1．2．1 细菌素对猪源病原菌的抑制作用 平板挖井法 1．2．2细菌素热稳定性 ·基金项目：大连市科技局计划项目 ‘通讯作者：庄国宏(1964一)，男．博士．主要从事兽医临床及微生态学方面的研发 E-mail：ze,hsam@yahoo．com．cn 氟三届癌离防控学术研讨台会谈论文辜 为对照．测定抻苗活性。虬F实验均川』=肠杆菌作为指示苗。 1．2j混合培养拮抗病辱茸实验 将大肠杆苗Olm金黄色葡萄球菌18小时培养物与嗜酸乳杆苗接I％接种量分别混合接种rMRs 液体培养基中，振疡培养48小时，每隔s4,时取样检涮与致病菌的活茁数。同时设致病菌单独培养作 为对照。 1．2．4试验用细菌素的捌备 发酵培养一离心去除菌体一40,／藏酸铵处理一细菌素沉淀一IllCO的缓冲液溶解一氧 仿萃取脱盐一细菌素干糟制备一成品 1．2j动特腑遣细菌性疾病治疗教粟 1．25．1实验用仔猪均自然发生仔猪黄白痢、日龄在10之l天。牺床表现仔猪呕吐、拉稀．发病 猪总教96头，随机分四组。每组24头．第一组使用细苗素，每头口服I／Joo浓缩渣OjmL．第二组细 菌素的剂量增加一倍。第三组作为对照使用庆大毒素，使用剂量按照使用说明。第四组氨苄青霉素， 使用剂量按照使用说明。 一 l 2．52在试验过程中，对试验动物每天的精神状态、粪便情况、采食情况、康复时间等进行 记录。 2结果与分析 2．1押曹活性一定结果 2．1．2对代裹性囊病酋的押苗活性 图匿 太瞄轩曹Om童黄色蕾蕾球曹 (田中左孔为对曩：棚m瓶水藩渣．右孔为t啦：pI．13．0绷蕾l碧蒗) 田l绷■蠢对鼢■II抑III拉幂 2．2量度辱响 随着温度的升高．嗜酸乳杆菌细菌素的抑苗话性有一定下降，但发酵上清液在121C处理20分钟 后仍能保持∞％以上的活性，这证嚼该细菌素具有相当好的热稳定性．结果见图3． 克雷怕氏曹199 II