实时定量双重荧光PCR方法检测牛分支杆菌引起的猪结核病研究.pdfVIP

匀浆4％NaOH处理时间超过18rain，可杀死结核分枝状不典型，临床诊断困难、产生抗体没有规律性，以 杆菌。本研究表明，病料处理应尽量减少环节，用 抗体为主的诊断方法难以施展。所以研究新型快速诊 min接种到酸性L_G培养断方法迫在眉睫。 2％NaOH处理匀浆样本30 基，然后用改良L—C纯培养，分离效果较好。 不同物种对不同型结核菌敏感性不同，据资料报 以宰后结核病灶为参考评价PPD皮内试验，其敏 道。猪息禽型结核较多见。且主要呈现消化道淋巴结 感性为96．8％，特异性为100％。Youden指数为0．968，核。我们分离的病原，经鉴定为牛型结核分枝杆菌， 可以作为猪结核病检疫分群的方法。但皮内变态反应 它可在动物、人类间扩散以及在人和动物间交叉感染 干扰因素多，与其它非结核分枝杆菌存在交叉反应； 引起人的结核病，具有重要的公共卫生学意义，所以 试剂质量不一。不同生产厂家、不同批号的、国内和 我们必须高度关注结核杆菌在多个物种问跨种传播以 国外的PPD试剂质量有差异，剂量标准没有统一，我 及在人一猪一其它动物一环境间循环的问题；关注猪结 国执行的标准与OIE的有较大差距，判断标准包括判 核病在其它动物结核病及人类结核病传播中的地位。 定时间没有统一。这些均有待于在今后的研究中完善， 参考文献 为制定猪分枝杆菌病检疫技术规范提供依据。 我们处理了159份样本，只从病变肺门淋巴结中 [1]郝士海．现代细苗学培养基和生化试验手肌M】．北京：中国科学技术 分离出3株牛型结核分枝杆菌，其它样本均未分离到 出版社，1992。266--273． 病原，这可能是我们采样量不够或者对样本处理方式 [2]B．E．斯特劳。等编，赵清明．等译．猪病学【M】，第8版．北京：中 不当所致。也可能是我们对牛型PPD阳性猪的排菌规 国农业大学出版社．2000。621-632。 律没有掌握而影响采样，以至于对J猪场牛型结核分 [3】OIE著农业部畜牧兽医局．译．哺乳动物、膏、蜜蜂A和B类疾病诊 枝杆菌的来源没有通过该试验得到确认。这要求我们 断试验和疫苗标准手册IM】．北京：中国农业科学技术出版社， 从其它角度作进一步研究。 2002．17．加． 结核分枝杆菌分离与鉴定方法是诊断结核病的重 [4]孟昭赫，主编．食品卫生检验方法注解(微生物学部分)【M1．北京： 要依据，但培养周期长，过程繁琐。肉猪生长周期相 人民卫生出版社。1990．289-300． 对较短(通常6个月)o加之猪结核病病程不确定，症 实时定量双重荧光PCR方法检测牛分支杆菌引起的猪结核病的研究 郭明星1，朱堂明2 (1．湖北出入境检验检疫局技术中心武汉430022；2．宁波出入境检验检疫局宁波315000) 【摘要】目的建立一种快速有效地检测由牛分支杆菌引起的出口牲猪结核病的实时定量双重荧光PcR检测方法。方法以牛 分支杆菌165 建方法的敏感性、特异性、稳定性；尝试用5种方法对牲猪结核病疑似病料组织进行DNA提取；用建立的方法对搜集的猪结核病疑 似病料进行检测并与剖解方法和分离培养方法进行比较。结果建立的方法稳定性强、特异性和敏感性好。结论建立的实时定量 双重荧光PCR方法可快速、敏感，特异地检测由牛分支杆菌引起的出口牲猪结核病。 【关键词】实时定量；双重PcR；检测；牛分支杆菌；猪；结核病 猪结核病主要病原为禽分支杆菌，然而近年从供 目前，国内外用于诊断由牛分支杆菌引起的猪结 港肉猪中分离到牛分支杆菌的报道“叫引起了公众的 核病的检测方法是参考牛结核病的检测标准进行的。 广泛关注，同时也给我国出口肉猪的质量安全和肉猪 主要通过病原的分离、培养及鉴定来完成。但．由于 及肉猪产品的出人境检疫提出了新的挑战。 结核菌培养时间长(一般需要8周时间)，且有10％一 20％的病