微生物细胞数的计数-实验二.docVIP

实验二 《微生物细胞数的计数》 标准实验报告 适用专业： 环境工程 江苏科技大学学院2012年 月 1.了解血球计数板的结构； 2.掌握利用血球计数板计微生物细胞数的原理和方法 二、实验要求 1．遵守实验室安全制度，听从指导教师安排； 2．认真听讲，不懂就问； 3．完成实验报告 三、实验仪器和材料 四、血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。? 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。 1．16×25型的计数板? 将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数 2．25×16型的计数板? 中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL ＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数 、实验步骤及内容1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。 2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 酵母菌细胞数/mL= 计数区如下： 六、数据整理 七、实验过程中应注意事项及心得 1．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。 ．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。 ．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。 ．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格即100个小格的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格即80个小方格的酵母菌数。 ．计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。按公式计算每1ml（或10mL）菌液中所含的酵母菌个数。 ．血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。 1. 样品要尽量纯净，杂质多影响计数2. 样品浓度要适中，太浓， 太稀，计数不准确。25*16的，计数的时候每次计4个角加中间共五个格子，每个格子要求最低不少于5个对象颗粒，一般10~50个是比较理想的情况3. 每次计数五个格子，一般要做3个重复，得到数据后取平均值。如果某一次的计数偏离