微生物细胞的电化学识别与检测.pdfVIP

黑 龙 江 太 荦 白蒜 井 荦 荦 掇 年 ll卷 年4期 JOURNAL ∞ NATLrRAL SCIENCE Vo1．11No．4 微生物细胞 的电化学识别与检测 ；L／ (略尔藩医科太学公卫学 院) 摘 要 本文介 绍了一种 电化 学识剐和检测微生物细胞 的方法。测量研 究体 系为三 电板体系，工作 电极为平面熟解石墨 电板 ，抽滤在擞孔滤膜上的微生物细胞修饰在工作 电 极上，在 电子传递助荆的作用下，在磷酸缓冲液 中的状安 田上 的峰 电位压峰 电流具有 细胞 识剐与定量潮定的特征 。本文给出了识别与检测酵母茵与乳酶生茵的实例，并初步探讨 了细胞 识别 的机理 关键 词 微生物 电化 学识剐 峰 电位 峰 电流 ． 舷J ‘ 在食品、医药、医疗，环境及生物工程 中活 的微生物细胞 的检测非常重要 。传统的方 法有细胞经培养后 ，菌落计数，这种方法虽能区别出死菌与活菌 ，但检测过程 中需要较长 的培养时间 (一般的为 48小时或更多)，而且很不方便 。浊度方法及直接地显儆镜读 数方 法，虽始提高植 测速度，但前者不能 区别出活苗与死 菌，后 者虽然 可通 过染 色法 区别活苗 与死菌 ，但在确 定活菌数时 ，误差较大 ，而且很多菌不适合 于镜读 法。因此 上述方 法的使 用受到较大的局限性 。 近年来 ，人们开始注意活的细胞的 电化学识别 与检测 I，甚 至人体 的活细胞 的 电化 学识别 ，使用 的方法多为结台线性 电位扫描及半微分扫描技术 ，其基本原则为 ：细胞 的 伏安图上相应的特征峰 的峰值 电位具用识别意义，而相应 的峰值 电流则具有 定量橙 测意 义。因此，利用 电化学方法不但可以较快地识别微生物细胞 ，而且还可以快速地测定其细 胞总数。本文是利用平面热解石墨 电极为研究 电极 ，结合伏安测量技术，研究 了酵母 菌及 乳酶生菌的伏安响应 ，提 出了用 电化学方法识别与检测微生物细胞 的一种可能 的方法，并 初步探讨 了电化学识 别微生物细胞 的机理 。 1 实验 本实验所用的酵母菌 由桂林 啤洒厂提供，乳酶生酋由桂林制药厂提供 ，其它所用药 品 恒稿 日期：I993 09—02 104· 黑龙 i￡戈学 自熊科学学报 苹JJ暮 均为分析纯 。测量时所使用的菌液 ，一部分用于传统的菌落计数 ，另一部分则 同时用于传 感器测量 。测量前 菌液用磷酸缓冲液 (PH=6．8，浓 度为 0．1M)洗涤 。每 次取磷 酸缓 液悬 浮的菌悬 液 5—10ml抽 滤在 硝 酸 纤维紊膜 (Nitrocellulose一1LifeTechnologies，INC． USA)上 - 实验所用的电极系统为三 电极体系，研究 电极为平面热解石墨 电极 (BPG)，其 电极面 积为 O．5era，辅助 电极为铂 电极 (2cm)，参 比电极为 Ag—AgCI电极 ，研究 电极底端 有一托 架用 以固定菌膜 。实验 测试装置如 图 l所示。 线性 电位 扫描 由多功 能极谱 仪 (HS一1型)给 出，信 号记录 仪 为 LZ3—204型 函数记 录 仪。 露 { 每次测量前 电极 用氧 化铝粉 (0．3urn)在绒布上 打磨，然后用水冲洗干净 。实验 温度 为 37℃ 。 在测试 中，细菌细胞与 电极之 间的电子传递往 往 很 微 小 ，但 是加 入 一 些 添 加 剂 ，例 如 4。 4 联 吡啶等，可 以使检 测 电流 明显增 加 。添 加剂的作 用机理在燃料 电池型微 生物传 感 器 中及伏 安 型微生物传感 器 中是 不 同的。前者 是 电子传递 中间体及 电子放大作用 ；后者则 圈 】 电投体系丑捌试装置示意 圈 是微