蒽酮比色法测定可溶性糖.docVIP

蒽酮比色法测定可溶性糖 一、原理： 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光区的吸收峰为630nm，可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。 二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料 阴干野扁桃果实 （二）仪器设备 分光光度计、水浴锅、具塞刻度试管、移液管、容量瓶、定性滤纸等 （三）试剂 浓硫酸（比重1.84）、分析纯蔗糖、分析纯蒽酮、乙酸乙酯 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，用时微热溶解结晶。 三、实验步骤 （一）标准曲线 1、1%蔗糖标准液 将分析纯蔗糖在80℃下（2h）烘至恒重，精确称取1.000g，加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。 2、100μg/L蔗糖标准液 精确吸收1%蔗糖标准液1ml转入100ml容量瓶中，加水至刻度。 3、标准曲线 取20ml刻度试管11支，从0-10分别编号，按下表加入溶液和水。 试剂 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/L蔗糖液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/ml 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其吸光度，的数据如下： 吸光度 0 0.18 0.35 0.53 0.70 0.90 蔗糖含量 0 20 40 60 80 100 （二）可溶性糖的提取 1、提取 取野扁桃样品，擦净表面污物，称取果肉、果仁各5份（共10组）（详重见下表）分别放入10支刻度试管中，加5ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，提取液滤入25ml容量瓶，反复漂洗试管残渣，定容至刻度。 2、显色测定 吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中，加蒸馏水1.5ml。按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其吸光度，结果见下表： 果仁 样品干重（g） 吸光度 果肉 样品干重（g） 吸光度 1 0.04 0.279 6 0.04 0.227 2 0.04 0.622 7 0.06 0.452 3 0.03 0.321 8 0.07 0.335 4 0.03 0.262 9 0.05 0.344 5 0.03 0.25 10 0.05 0.333 平均 0.034 0.3458 平均 0.054 0.3382 四、结果计算 从回归方程求得糖量（y） ×提取液量（5）×稀释倍数（5） 可溶性糖含量＝ 吸取样品液的体积（0.5） ×100％ 样品干重（0.05）×106 实验结果： 野扁桃果仁可溶性糖含量＝5.74％ 野扁桃果肉可溶性糖含量＝3.54％ 新疆野扁桃果实糖酸 含量的测定 ——蒽酮比色法测可溶性糖 指导老师：曾斌 实验指导老师：帕提曼 实验学生：苏瑞（063231240） 实验时间：2008年10月 y=112.12x+0.2923 R2=0.9995