MDCK 细胞 ISG15基因的克隆表达及抗病毒活性分析.pdfVIP

浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis，2015，27(2)：154—159 http：／／www．zjnyxb．cn 刘爱玲，潘杰，庞运倩，等．MDCK细胞 ISG15基因的克隆表达及抗病毒活性分析 [J]．浙江农业学报，2015，27(2)：154—159． DOI：10．3969／j．issn．1004—1524．2015．02．04 MDCK细胞 ISG15基因的克隆表达及抗病毒活性分析 刘爱玲 ，潘 杰 ，庞运倩 ，于可响 ，马秀丽 ，宋敏训 ， (山东师范大学生命科学学院，山东济南 250014；山东省农业科学院 家禽研究所，山东济南250023；山东农业大学 动物科技学院 山东 泰安 271018) 摘 要：为了解 ISG15基因体外抗病毒机制，应用 RTPCR方法扩增了MDCK细胞的ISG15基因，经测序分 析，该基因序列与GenBank中登录的犬属 ISG15基因序列相似性为99％。将该基因亚克隆至pET-28a载体 构建出重组原核表达质粒p28a—M15；工程菌 p28a—M15／BL21经 IPTG诱导表达，获得了约22kD的重组 目的 蛋白，重组蛋白经Ni“柱层析纯化。于H9N2亚型禽流感病毒 S2株感染前后在MDCK细胞中定量加入纯化 的ISG15蛋白，结果显示，病毒感染 MDCK细胞前加入 ISG15蛋白可以抑制病毒的复制，但病毒感染后添加 该蛋白则促进了病毒的复制。 关键词：ISG15；MDCK细胞系；抗病毒活性；H9N2 中图分类号：S858．32 文献标志码 ：A 文章编号：1004．1524(2015)02-0154-06 CloneandexpressionofISG15genefrom MDCK cellandanalysisofitsantiviralactivity LIU Ai—ling ，PAN Jie ，PANG Yun—qian。 YU Ke．xiang2 MA Xiu．1．i．，SONG Min—xun ， ， ， (CollegeofLifeSciences，ShandongNormalUniversity，Jinan250014，China；InstituteofPoultryScience，Shah— dongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250023，China；Colleeeo厂AnimalScienceandTechnology，Shandong AgriculturalUniversity，Taian271018，China) Abstract：ISG15genewasclonedfrom MDCKcellsusingRT—PCR，andthealignmentofISG15withthereportedse— quence(GenPeptdatabank：XM一003639053．2)revealed99％ nucleotidesequenceidentities．TheISGI5was clonedintoexpressionvectorpET一28atoconstructtheexpressionplasmidp28a—M15，andwasexpressedinEsche— richiacoli．TheproteinexpressioninE．coliinducedbyIPTG wassecretedinthesupernatantwitharecombinant proteinofabout2．2kD．TherecombinantproteinwaspurifiedusingNi—chelateaffinitychromatographyandthen addedintoMDCK cellsquantitativelywithandwithoutAIV H9N2subtypeinfection．TheresultsshowedthatISG15 proteincould