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- - — — 332．—·— 江苏农业科学 2015年第43卷第2期 孙 勇，蒋继宏，张海燕．植物内生木霉的鉴定及其抑菌活性 [J]．江苏农业科学，2015，43(2)：332—333 doi：10．15889／j．issn 1002—1302．2015．02．108 植物内生木霉的鉴定及其抑菌活性 孙 勇，蒋继宏，张海燕 (江苏师范大学／江苏省药用植物生物技术重点实验室，江苏徐州221116) 摘要：对分离ac健康植物的6种内生木霉菌进行活化 ，再观察菌落形态、颜色 ，测量生长速度，观察孢子形态，测量 孢子直径范围，进而对供试菌株进行分类鉴定。结果初步鉴定，DBs0—13为多孢木霉 (Trichodermapolysporum)，DBs57 为里氏木霉 ( reesei)，DBs66为长孢木霉 ( longipile)，40为绿色木霉 ( viride)，171为康氏木霉 ( koningii)，292 为哈茨木霉 ( harizianum)。采用生长速率法测定供试真菌发酵液 (相当于稀释 1O倍)对4种病原真菌的抑制效果。 结果表明，6木霉菌对小麦赤霉菌、苹果轮纹菌、油菜菌核菌和可可球二孢菌都有不同程度的抑制作用 ，其中DBs0—13 和 171的抑菌率相对较高，并对4种病原真菌都具有抑制作用 ；6种木霉菌中抑菌率最高的是 DBs0—13，其对油菜菌 核病菌、可可球二孢的抑制率分别为62：89％、41．12％。 关键词 ：内生木霉菌；分类鉴定；形态特征；生长速率；病原菌；抑菌活性；生防菌 中图分类号 ：s432．4 4 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2015)02—0332—02 植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物组织 水 1000mL，pH值 自然。 和器官内部的真菌或细菌，目前已成为生物防治中有潜力的 1．2 方法 微生物农药、增产菌或作为潜在生防载体菌而加以利用 ]。 1．2．1 木霉菌的活化 将冷藏菌种取出，在无菌条件下用接 木霉属(Trichoderma)属于半知菌亚门丝孢纲丝孢 目黏孢菌 种环挑取供试菌的少量菌丝 (或0．5amx0．5am的菌落)至 类 ，分布比较广泛，是典型的土壤和木材腐生真菌。木霉 含 PDA培养基的平板中，于 28℃培养箱中培养 3d。 菌是有效的生物农药资源，适应性广，生存能力强，对植物病 1．2．2 木霉菌株生长速度的测定 将活化过的木霉菌落用 原菌拮抗作用广谱，在防病的同时还能产生多种酶分解土壤 打孔器打孔，获得的菌饼接于新培养基中，于28℃培养箱中 中的植物残体、降解大分子化合物以便吸收利用，能与土壤中 培养3d，采用十字交叉法测定菌落直径，计算出生长速度，同 其他益菌协调生长、不污染环境等 。笔者在分离植物 内 时观察菌落颜色、形状等。 生菌的过程中获得了几株植物内生木霉菌，鉴于木霉菌的生 1．2．3 载玻片的培养 将灭过菌的PDA培养基于微波炉中 防特性，对分离到的内生木霉菌进行了分类鉴定和抗植物病 融化，待培养基温度降到40～45℃时于超净工作台中倒平 原菌活性分析，为植物内生木霉菌的利用提供依据。 皿 ，要倒得尽量薄 (0．1～0．2cm厚)，待冷却。在上述培养皿 中挑取大约0．5am×0．5am的培养基于灭过菌的载玻片上， 1 材料与方法 然后挑取培养皿中菌种的菌丝于琼脂块的3个角上，再盖上 1．1 供试材料 灭过菌的盖玻片，用记号笔轻轻敲 l下，以免盖玻片移动，在 1．1．1 材料来源 6株木霉供试真菌 (DBsO一13、DBs57、 玻片上做好标记 ，于28℃培养箱中培养3d左右 (整个过程 DBs66、40、171、292)分离 自健康植物组织中，为徐州师范大 都要保证无菌状态)。 学药用植物重点实验室保藏菌种。 1．2