新乡市某猪场猪瘟病毒的鉴别检测.pdfVIP

动物医学进展 。2015，36(3)：120—123 Progressin VeterinaryM edicine 蔷 ， 秣兽医临床 ％ 噜 ’ 新乡市某猪场猪瘟病毒的鉴别检测 孔令芸 ，陈玲丽 ，李 冲 ，孙相和 ，李 鹏 ，王选年。，银 梅H (1．河南科技学院动物科学学院，河南新乡 453003；2．新乡学院生命科学与技术系，河南新乡 453003) 摘 要 ：新 乡市某猪场发生疑似猪瘟病例 ，为 了鉴别其为疫苗毒还是野毒，采用细胞免疫化学方法和 RT—PCR，并对其 NS5B基 因进行序列测定，序列比对并构建进化树，结果表 明，猪只为猪瘟野毒感染，且分 离的猪瘟病毒与石 门(Shimen)株在基因序列上未发生大的变异。 关键词 ：猪瘟病毒 ；免疫细胞化学；反转录一聚合酶链反应 ；序列分析 中图分类号 ：$852．651；$858．28 文献标识码 ：B 文章编号 ：1007—5038(2015)03—0120—04 猪瘟 (Classicalswinefever，CSF)是 由猪瘟病 毒的RT—PCR方法还很少见 。用于猪瘟病毒分子 毒 (Classicalswinefevervirus，CSFV)引起的一种 流行病学分析的核苷酸 片段主要有 5NTR、NS5B 急性、热性和高度接触性传染病_l】]，其特征为高热稽 和 E2等 ，其中NS5B和 E2可用于毒株间的精确 区 留和全身广泛性出血 。在世界各地均有不 同程度的 分 ¨3]。王琴等发现 CSFV 的E0、E2和 NS5B基 因 流行 ，我 国将此病列为一类动物疫病 ，世界动物卫生 分群结果是一致 的，初步认为 3个基 因在 系统发生 组织 (OIE)将其列为必须报告 的动物疫病 ]。猪瘟 分析中具有高度的一致性 ¨5]。而 wuH x等 对 病毒 (CSFV)为黄病毒科瘟病毒属成员，基 因组为单 C一株全基 因组测序后发现 ，CSFVC一株在基 因组 的 股正链线性 RNA，具有感染性，沉降系数为 40S～ 3UTR区域较石 门(Shimen)株多 了 1个富含 T的 5OS，分子质量为4×10。ku，长度为 12．3kb。包含 短片段差异序列 ，提 出这个分子标记是 CSFV 强毒 一 个开放性 阅读框架 (ORF)，编码一个 由3898个 适应兔体致弱而产生的遗传标记 ，利用这一特点更 氨基酸组成 的多聚蛋 白。此多聚蛋白经病毒和宿主 有利于猪瘟强毒与疫苗毒 的区分。所 以，利用基因 细胞酶的作用形成 4个结构蛋白(C、E0、E1、E2)和 测序及进化树分析方法则可 明确 区分野毒与疫苗 8个非结构蛋 白(p7、N 。、NS2、NS3、NS4A、NS4B、 毒。2013年 l1月新 乡市某猪场 发生疑似猪瘟病 NS5A、NS5B)。NS5B是负责 CSFV基 因组复制 的 例 ，本研究采集病猪淋 巴组织 ，分离鉴定病毒 ，并对 主要聚合酶 ，还具有 RNA依赖 的 RNA酶活性 ，它 其 NS5B基 因进行测序分析 ，为猪瘟诊断的进一步 通常被用来做流行病学和 RNA干扰研 究l3]。CS— 研究奠定基础 。 FV可在猪的骨髓 、睾丸、肺 、脾和肾的细胞培养物及 l 材料与方法 白细胞中增殖 ，最 常用 的是 PK一15、SK6和 CPK 细 1．1 材料 胞系，其中最易感 的是 PK一15、PK一2a和 ST等几种 1．1．1 病料 采集新乡市某猪场疑似猪瘟样品(淋 猪肾和猪睾丸细胞系。 巴结)。 中国在 1954年就成功研制出了猪瘟兔化弱毒 1．1．2 主要 试剂 ExTaqDNA 聚合酶 、DNA 疫苗 (HCLV株)，被世界公认是最优秀 的猪瘟疫苗 MarkerDL 2000，TaKaRa公 司产 品；HRP标 记 并应用至今 。但 由于 HCLV株免疫猪群在血清学 IgG、AEC显色试剂盒，北京 中衫金桥生物公司产 上无法