中国九个家驴品种mtDNAD-loop遗传多样性和系统进化研究.pdfVIP

中国九个家驴品种mtDNA D—loop遗传多样性与系统进化研究 杨博辉，刘建斌，郎侠，孙晓萍，郭健，程胜利 (中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，兰州730050) 摘要：本文利用Dnasp4．10软件对中国9个家驴品种162个个体的mtDNAD-loop区385bp进行遗 传多棒№分析，共检测到32种单倍型35个核苷酸多态位点，其单倍型多样度为0．8137—0．9722，核苷 比亚野驴、3个索马里野驴和6个亚洲野驴的序列构建NJ系统发育树及利用NF．：1WORK软件作网络亲 缘图，并进行系统进化分析．结果表明我国家驴的母系起源是非洲野驴中的努比亚驴和索马里驴。亚洲 野驴不是中国家驴的母系祖先． 关键词：驴；mtDNA D-loop；系统进化；起源 中国养驴历史悠久，品种资源丰富，生态类型多样，拥有23个地方品种【IJ．线粒体DNA(mtDNA) D-loop序列已被广泛用于家畜的起源进化、亲缘关系和群体遗传结构研究阱l。传统观点认为中国家驴的 祖先是亚洲野驴(F．quusasinu)的亚种—骞驴(Equusasinushemionus)，主要依据是史料记载及形态体貌 特征推断嘲；现代的观点认为中国家驴的祖先是非洲野驴，驯化后经阿拉伯地区进入中国【6】．1vankovic 等r7憎次研究了克罗地亚地区3个家驴品种的mtDNA遗传多样性，共发现3个单倍型组。分属于2个母 A例等对世界范围内的家驴进行系统研 的非洲起源有两个分支即努比亚野驴和索马里野驴：Beja-pereira 究，证明了家驴的非洲起源观点，并通过分析细胞色素b基因全序列估计了这两个分支的分化时问约在 Creole驴起源于非洲。然而对中国家驴的mtDNA 3．039．10万年前。Lopez掣10钲明Mexican D-loop遗 传多样性与系统进化研究的报道甚少，仅有Lei．C和Gc．Q掣¨‘12】对中国家驴品种的mtDNA遗传多样性 进行过研究，指出中国家驴有两个母系来源，可能起源于非洲野驴但并未指出是否起源于努比亚野驴和 索马里野驴。因此，有必要进一步扩大样本含量在分子水平研究中国家驴的遗传多样性和起源．为我国 家驴品种资源保护和培育新品种提供科学依据。 l材料与方法 I．I材料 1．1．1样本 实验所用9个家驴品种包括大、中及小型驴，分别采自山东、陕西、河南、甘肃、新疆和云南六省． 样本数量、类型和采样地点见表l。采用颈静脉法，每头驴采集血液5mL，EDTA作为抗凝剂，低温条件 下带回实验室，．70℃保存备用。 1．1．3试剂 marker均购自宝生 基因组提取试剂盒购于北京天根生化科技有限公司，Taq酶、dNTP$和DL2000 物(大连)T程有限公司。 I．I．4主要仪器 3730PRISM PCR仪为PTC=200型PCR仪，测序仪为上海生工生物工程有限公司ABIDNA测序仪。 ·基金项目：科技部国家基础工作专项资助(2003DEB5J045)． 作者简介： 杨I冉辉(19甜一)，男。甘肃会宁人．博士，副研，硕导，主要从事动物遗传学研究． Tel：0931-2656014,13993 17i126；E-mail：yangbh2004@163．∞m 900 第十一次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 1．2方法 1．2．I基因组DNA提取 按照试剂盒说明书操作，稍作改动以优化试验结果。 1．2．2PCR扩增 反应体系为509L，其中模板DNA3．0止，10xbuffer5．I止，dNTP4．O止，引物Pl、P2各1．0I_sL， 1细酶0．4皿，ddH20 35个循环：最后再72℃延伸10min． 1．2-3琼脂糖凝胶电泳检测 用1％的琼脂糖凝胶电泳检测提取的线粒体基因组DNA． 1．2．4PCR产物纯化 采用宝生物(大连)工程有限公司的DNA片段