应用组织芯片对细支气管肺泡癌与肺腺癌EGFR基因扩增的研究.pdfVIP

应用组织芯片对细支气管肺泡癌和肺腺癌 EGFR基因扩增的研究 宋欣，吕亚莉，钟梅，李向红 (中国人民解放军总医院病理科，北京100853) 摘要 间中国人民解放军总医院病理科常规病理诊断中确诊为肺腺癌和BAC的病例按照2004年WHO最新肺肿瘤分类标准重新 扩增率为14．81％，经典型肺腺癌的扩增病例明显多于BAC(P．0．05Xu=8．143)．其中经典型肺腺癌扩增病例中，5例为散在 扩增信号，5例为呈簇扩增信号；BAC扩增病例中全部以散在扩增信号存在，EGFR基因扩增多以散在信号存在。结论： 在肺腺癌和BAC病例中，肺腺癌的扩增率高于BAC，展现了BAC向肺腺癌的分子发展变化过程。 关键词：细支气管肺泡癌；肺腺癌；F．GFR；HSH；组织芯片 肺癌是世界范围内发病率和死亡率增长最快，预后最差的恶性肿瘤之一，死亡率在全球范围内居首位。 cell 其中非小细胞性肺癌(non-small lung 最差的类型之一。细支气管肺泡癌(broehioloalveolar 临床与病理学特征tl列J。 在差异，有学者研究EGFR-啊作为辅助治疗与一线化疗相结合，将提高病人的生存率。目前还未能找到 insitu 一个治疗使用gefitinib的简单有效标志，免疫组织化学、FISH(fluorescenthybridization)、临床特征， 哪种检测手段方法可提示临床病人对EGFR-TKI敏感，仍不十分清魁伽。基因测序、突变分析虽然能提供 依据，但相对难以普及。 我们对细支气管肺泡癌和经典型肺腺癌EGFR的基因扩增情况进行了比较分析，为进一步研究肺癌的 发生机制和EGFR扩增的关系以及使用EGFR抑制剂在治疗中的分子机制提供有价值的资料。 1材料与方法 重新整理回顾。由两名医师按照2004年WHO最新肺肿瘤分类标准重新分类、诊断，有异议时，两人共 同讨论决定。选取BAC 基因扩增的检测。 1．2方法 1．2．1组织芯片制作 标本经4％甲醛固定，石蜡包埋。首先在普通光镜下对肿瘤组织的HE切片进行形态学观察，选取组织 结构正常、没有出血、坏死的肿瘤组织及所需部位并在蜡块的相应位置定位。根据病例数、肿瘤发生部位、 年龄情况设计组织芯片的阵列。以0．6ram直径空心取样针取样，芯片中每两个点相距0．6mm。切片厚3～ 41ma。 170 1．2．2FISH检测 采用荧光原位杂交直接法，选用Ⅶsis公司的EGFR探针试剂盒。切片脱蜡入水，自然干燥或45℃．50℃ 条件下干燥2-5mira浸入0．2N 眭：蒸馏水洗；2×SSC 干燥后加入探针(73±1℃变性5mia)，立即盖上盖玻片，放入37℃杂交仪(美国StatSpin公司)杂交12-16h： 液中2min；置于2xSSC／0．3％NP40中洗5．60s；避光，空气干燥标本；DAPI染细胞核，室温15rain；荧 光显微镜观察，．20℃保存杂交玻片。 1．3结果判定 荧光原位杂交信号：细胞核内绿色信号为7号染色体信号，橘红色信号为EGFR基因信号。当肿瘤细 胞内出现成簇的橘红色扩增信号或肿瘤细胞内橘红色信号与绿色信号比值丑，以及当肿瘤细胞为多倍体 时。40％以上的肿瘤细胞内有4个以上的散在橘红色信号出现者为阳性扩增【7】。 1．4统计分析 对EGFR扩增结果运用SPSS统计软件进行X2检验，设P0．05为具有统计学意义。 2．结果 EGFR FISH阳性扩增主要有三种形式存在，一种为肿瘤细胞内出现成簇的橘红色扩增信号，一种为肿 瘤细胞内橘红色信号与绿色信号比值塑，还有一种为当肿瘤细胞为多倍体时，40％以上的肿瘤细胞内有4 个以上的散在扩增信号出现。EGFR的扩增大多为第三种扩增形式口】。 例经典型肺腺癌病例中，由于组织芯片内组织的差异性，在处理过程中造成消化的不一致性，有一例点位 全部丢失，最终检测经典型肺腺癌病例22例，其中多倍体扩增5例，成簇扩增5例，阳性扩增率为45．45％。 EGFR基因扩增的病例中，以散在扩增信号存在的病例为10例，以呈簇扩增信号存在的病例为5例，EGFR 基因扩增多以散在信号存在。(图1，2，3) 阳