RSCs移植联合COP-1免疫治疗对青光眼模型鼠RGCs的保护作用.pdf

本课题在医学遗传学国家重点实验室完成 中文摘要 第一章鼠青光眼模型的建立和视网膜干细胞的培养及鉴定 目的：建立鼠慢性青光眼模型，观察各组鼠眼压的变化。培养视 stem 网膜干细胞(retinalcells，RSCs)，鉴定并观察其分化特点。 方法：取正常成年SD大鼠，采用532．二极管激光行270。角膜缘 血管网及三条浅层巩膜静脉光凝，建立鼠慢性青光眼模型。取正常成 年SD大鼠眼球，仔细分离出睫状体边缘区的视网膜组织块(包括色素 组织)，消化成单细胞悬液后置于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、 表皮生长因子(EGF)、B27的无血清培养液中进行干细胞培养，免疫细 胞化学染色鉴定细胞的表型及分化特征。 结果：成功建立21只大鼠慢性青光眼模型，在激光光凝后14d， 眼压达最高峰，其平均值为31．64-3．2mmHg，对侧对照眼为 验组眼压差异无显著性。培养的RSCs中干细胞标记物神经丝蛋白 (Nestin)表达阳性，细胞增殖标志物5．溴脱氧尿核苷(BrdU)表达阳性。 RSCs分化细胞中神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达阳 性，胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性。 结论：采用532二极管激光角巩膜缘血管网及浅层巩膜静脉光凝 能成功升高鼠眼内压，建立大鼠慢性青光眼模型；睫状体边缘区的视 网膜组织块消化培养法能成功地培养出成年鼠RSCs，且RSCsn…v,分化 成神经元和胶质细胞。 第二章 的表达差异 疗慢性青光眼模型鼠后眼内房水及血中IFN一丫的表达差异，明确RSCs 移植和COP．1联合治疗青光眼的机制。 方法：采用532二极管激光光凝建立SD大鼠慢性青光眼模型，实 验分为六组：①PBS伊BS治疗组：青光眼模型鼠后足皮下注射PBS， 七天后玻璃体腔内注射PBS；(室)PBS／RSCs治疗组：青光眼模型鼠后足 皮下注射PBS，七天后玻璃体腔内注射携带绿色荧光蛋白报告基因的 COP．1，七天后玻璃体腔内注射PBS； 光眼模型鼠后足皮下注射0．2mg COP．1，七 (至)RSCs／COP．1治疗组：青光眼模型鼠后足皮下注射0．2mg 不做任何治疗；⑥正常对照组。采用ELISA检测各组眼内房水及血中 cells，RGCs)的凋亡情况。采用免疫组织化学及全视网膜铺片 ganglion 观察移植的RSCs的融合情况。 结果： RSCs／COP．1治疗组较其它组房水及血中IFN．Y的含量明 显减低(尸O．05)，分别为2371．9 RSCs／COP-1治 ng／L和710．9ng／L， 合入宿主视网膜神经节细胞层和神经纤维层中。 结论：RSCs移植和COP．1联合治疗可以通过减少慢性青光眼模型 鼠眼内房水及血中IFN．Y含量，阻止RGCs的凋亡，其机制之一可能 与COP一1介导的自身性免疫保护作用及干细胞的免疫调节作用有关。 移植的RSCs融合到宿主视网膜中。 II 第三章 RSCs移植和COP一1联合治疗对青光眼模型鼠RGCs 的保护作用 目的：探讨RSCs移植和COP．1联合治疗对慢性青光眼模型鼠 RGCs的保护作用。 方法：采用532二极管激光光凝建立SD大鼠慢性青光眼模型， 实验分为四组：@PBS／PBS治疗组：青光眼模型鼠后足皮下注射PBS， 七天后玻璃体腔内注射PBS；@PBS／RSCs治疗组：青光眼模型鼠后 COP．1，七天后玻璃体腔内注 组：青光眼模型鼠后足皮下注射0．2mg RT-PCR、Western Blot等方法研究各组视网膜中神经营养因子BDNF、 IGF．I的表达差异，通过视网膜切片及TUNEL染色检测各组RGCs 的凋亡，并进行RGCs计数。 结果： RSCs／COP．1治疗组较其