δEF1调控乳腺癌细胞增殖和骨转移的功能及研究.pdf

中文摘要 中文摘要 第一部分：6EFl在乳腺癌细胞增殖中的功能研究 乳腺癌是女性最常见的多发恶性肿瘤之一，无限增殖是几乎所有肿瘤细胞 的特征之一，乳腺癌也毫不例外，乳腺癌细胞的异常增殖以及随后发生的转移 过程所涉及的生物学过程及其原理尚不很清楚，这严重影响了乳腺癌的预防和 治疗进展。8EFl(8．crystallin factor1)隶属于一类锌指结构的转录 enhancer-binding 因子超家族，具有广泛的转录抑制功能。该转录抑制功能主要依靠其两端的锌 指结构簇与被调控基因的上游启动子中E2．box的结合而实现。虽然已知8EFI 是癌细胞增殖和分化的一个重要的调节因子，但是关于它在调控细胞周期进程 中的潜在功能还不是很清楚。 8EFI蛋白，可以明显促进细胞数目的增多；敲除掉内源的8EFI，则反之。BrdU 以非常明显使细胞周期处于S期的细胞的数目增加；用RNA干扰技术敲除掉 8EFI，则可以得到相反的效果，这就说明8EFI可以促进乳腺癌细胞G1．S期的 转换。 在初步证实了8EFI可以促进乳腺癌细胞从G1向S期的转化的情况下，我 1表达量 在转录水平还是翻译水平，均可看到CDK2和CDK4表达量的增加，p2 的表达量明显被上调。 表达，首先，我们构建了一系列不同截短长度的人p21启动子的荧光素酶报告 中文摘要 的转录。 我们又在雌激素受体ER阴性的MDA．MB．231，ER阳性的MCF．7、ZR．75．1、 T47．D四种人乳腺癌细胞中用实时定量PCR和westernblot方法检测到5EFl和 p21表达呈明显的负相关。进一步在22例人乳腺癌组织临床标本中，实时定量 而调控乳腺癌细胞周期进程。 综上所述，在乳腺癌细胞中，6EFl通过下调p21的表达，同时上调CDK2和 面的研究，必将为我们如何防治乳腺癌提供一些新的思路。 CDK；细胞周期；乳腺癌； 增殖 关键字：5EFl；p21； 第二部分：6EFl在乳腺癌细胞骨转移中的功能研究 在乳腺癌转移的很多阶段中，上皮细胞向间充质细胞的转化EMT是癌细胞 扩散机制的基础，5EFl是含有锌指结构域的转录因子超家族的成员，在乳腺癌 EMT和骨重建中起着重要的作用。 我们发现8EFl在具有高迁移倾向的MDA．MB．231细胞中表达量较高，在具 有低迁移倾向的MCF．7、T47．D和ZR．75．1细胞中表达量较低，并且在 MDA．MB．231中过表达8EFl可以促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭，而敲除掉内源 性的8EFl的表达，则乳腺癌细胞的迁移和侵袭会受到抑制。 骨是乳腺癌发生转移的主要靶器官之一，乳腺癌骨转移的发生往往伴随着成 骨细胞和破骨细胞功能的紊乱。因此我们研究了MDA—MB．231细胞中6EFl表达 的变化对乳腺癌诱导的破骨细胞成熟，成骨细胞成熟和钙沉积的影响。结果表 明，过表达iSEFl 细胞TRACP活性的能力，进而促进破骨细胞的分化；而且可以抑制BMP．2诱导 钙素的表达增加，从而抑制成骨细胞的成熟；还可以减少MC3T3．E1细胞被茜素 红染色的细胞数从而抑制成骨细胞的钙沉积。这就证实用过表达6EFl的 MDA．MB．23l中收集的条件培养基可以明显的诱导破骨细胞的成熟，并且同时 抑制成骨细胞的分化和矿化：另一方面，敲除5EFl表达的MDA．MB．231细胞的 条件培养基则表现出相反的作用。 中文摘要 为了探索8EFI在乳腺癌骨转移中的具体分子机制，我们检测发现在 蛋白酶．1 的AP一1元件完全没有任何作用响应。ChIP实验证实过表达8EFl可以明显的使 子的活性。 AP一1的组成元件己被证明是MAPK信号通路的下游分子，Western blot实验 些结果表明SEFl通过调节肿瘤微环境中生长因子来促进乳腺癌的骨转移过程中 发挥着重要的作用。 关键词：6EFl；增殖；MMP—l；