δ-catenin在结直肠癌中过表达并与P120cth竞争性结合E-cadherin促进肿瘤细胞的增殖和侵袭.pdf

·中文论著摘要· 合E．cadherin促进肿瘤细胞的增殖和侵袭 刖 置 结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内其 发病率每年以2％的速度增长。随着诊疗技术的不断进步，结直肠癌患者的预后有 了一定改善，但病死率仍居高不下。导致结直肠癌患者死亡的主要原因是复发和 转移，而细胞间粘附的缺失在肿瘤侵袭和转移的过程中发挥着至关重要的作用。 接的形成和维持其稳定上发挥着至关重要的作用。E．cadhefin通过与多种连环蛋白 catenin (catenin，Cat)结合形成钙粘蛋白．连环蛋白复合体(cadherincomplex，cco， 维持细胞间粘附连接稳定。 钙粘蛋白结合位点和功能方面存在差异。P120ctn最初被证实为Src癌蛋白的主要 E钙粘蛋白的稳定和细胞间的粘附，并与Kaiso形成复合物调控基因的表达。 连环蛋白家族的成员之一。最初认为8-catenin仅表达于大脑神经元，但最近的一 些研究发现8．．catenin与癌症也存在着密切的关联。Burger等报道与良性前列腺增 生相比，前列腺癌中8-catenin的转录明显上调，其蛋白表达也显著增加。Zhang 等又报道了8-eatenin在肺癌组织中过表达并促进非小细胞肺癌的恶性表型。这些 的表达情况如何、8-catenin的表达与结直肠癌临床病理因素之间存在怎样的关系 1 目前尚不清楚。8-catenin和P 之间是否存在关联也还尚需证明。 本研究中，我们检测了ll 的表达情况并探讨了它们的表达与临床病理因素的关系。同时在结肠癌细胞系中 8-catenin对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。 材料与方法 一、标本与患者资料 l 10例结直肠癌标本及15例正常结直肠组织(外伤等非肿瘤原因肠切除标本) 标本，收集自中国医科大学附属盛京医院病理科存档蜡块。其中有详实术后随访资 料的70例为2004年4月．2005年7月手术切除的标本。所有病例均为首发肿瘤， 术前未接受放疗和化疗。男性67例，女性43例，年龄31．87岁(中位年龄61岁)。 以InternationalUnion Against 例，U期39例，III期42例，Ⅳ期15例。纳入病例均为腺癌：其中高分化36例， 中分化55例，低分化19例。另外收集30例新鲜结直肠癌及癌旁正常肠粘膜组织 (距癌灶边缘5em以上的最远端切缘)用于提取蛋白质，标本取出后立即放入 ．80℃冰箱保存备用。 二、免疫组织化学染色 关系，并分析其中40例原发灶与转移灶配对的标本中8-catenin表达的差异以及另 外70例随访标本中8-catenin的表达与患者预后的关系。 三、细胞培养，质粒转染和RNA干扰 e．。aco．2细胞；选择干扰效果较好的8-catenin SW620细胞系。 2 将P120em 效果较好的P120cmsiRNA序列导入P120ctn表达较高的caco．2细胞系。 四、WesternBlot 克隆抗体8-catenin或E．cadhefin4C孵育过夜，辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵 育2小时后ECL显色。 五、免疫共沉淀 收集细胞，充分裂解提取蛋白。向3001xg蛋白裂解产物中加入3Ilg诱饵蛋白 的抗体，4C孵育过夜后；加入40rtl 分洗涤后去除上清，加入30I．tl的SDS上样缓冲液水浴变性。将获得的免疫共沉淀 产物，随后进行WesternBlot检测。 六、细胞增殖和侵袭能力的测定 为观察8-catenin对结肠癌细胞生物学行为的影响，分别过表达与敲除 8-catenin后，利用MTT、基质胶侵袭实验来检测细胞增殖和侵袭能力的变化。 结 果 一、8-catenin在结直肠癌组织中高表达并与患者不良预后相关 8-catenin在正常肠粘膜的胞浆中不表达或呈现较弱的信号，根据评分标准判 患者的细胞分化程度、TNM分期和淋巴结转移密切相关(P0．05)。 达在TNM高分期和有淋巴结转移的患者中显著增加(PO．05