液相色谱分离法.pdfVIP

五、液相色谱分离法 （一）色谱法分离原理 色谱法（Chromatography ）又称层析法，是一种高效分离方法，它利用物质 在两相中的分配系数（由物理化学性质：溶解度、蒸汽压、吸附能力、离子交换 能力、亲和能力及分子大小等决定）的微小差异进行分离。当互不相溶的两相做 相对运动时，被测物质在两相之间进行连续多次分配，这样原来微小的分配差异 被不断放大，从而使各组分得到分离。本节主要介绍经典的液相色谱法，包括柱 色谱、纸色谱和薄层色谱。 1、固定相和流动相 色谱分离体系有两个相构成，固定的一相称为固定相（stationary phase ）， 移动的一相称为流动相（mobile phase ）。 固定相，在经典柱色谱中也称为柱填料。通常是一些具有特定的分离性质， 具有一定粒度和刚性的颗粒均匀的多孔物质，如吸附剂、离子交换剂、反相填料 等。 流动相有气体和液体两种。在经典柱色谱中流动相也称为洗脱剂，液相色谱 的流动相通常由混合溶剂以及一些添加剂（如无机盐、酸等）组成。流动相对样 品组分要有一定的溶解度；粘度小，易流动；纯度要高。 色谱分离应根据被分离物质的结构和性质，选择合适的固定相和流动相，使 分配系数K值适当，以实现定量分离的目的。因此，固定相和流动相的选择是色 谱分离的关键。 2 、色谱分配系数 在色谱分离时，溶质随着流动相向前迁移，在这个过程中，它既能进入固定 相，又能进入流动相，即在两相之间进行分配。分配系数定义为 对于确定的色谱体系，K值在低浓度和一定温度下是个常数，它的大小取决 于的溶质的溶解、吸附、离子交换等性质。 在色谱分离过程中，K值大的溶质，在固定相的停留时间长，移动速度慢。 两个化合物之间的K值相差越大，越容易分离。 （二）柱色谱 柱色谱（Column Chromatography）是最常见的色谱分离形式，它具有高效、 简便和分离容量较大等特点，常用于复杂样品分离和精制化合物的纯化。 柱色谱主要有吸附色谱和分配色谱两类。前者常用氧化铝或硅胶为柱填料。 后者以硅胶、硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收一定量的特殊液体作为固定相。 1、吸附柱色谱法 （1）分离原理 吸附柱色谱法是利用各组分在吸附剂与洗脱剂之间的吸附和溶解（解吸）能 力的差异而达到分离的。当组分分子到达吸附剂表面时，由于吸附剂表面和组分 分子的相互作用，使组分分子吸附在吸附剂表面。当洗脱剂连续通过吸附剂表面 时，由于洗脱剂对组分分子的作用力，组分分子会被洗脱剂溶解下来，在一定的 温度下，吸附和溶解达到平衡。但由于洗脱剂不断地移动，这种吸附和溶解过程 会反复发生并建立新的平衡，组分分子就随洗脱剂移动，移动速度与组分分子的 平衡常数和洗脱剂的流速有关。当流速一定时，各组分就依据吸附平衡常数的不 同而得到分离。 （2 ）吸附色谱吸附剂 在吸附色谱中，为了使试样中各种在吸附能力稍有差异的组分能够分开，必 须选择适当的固定相（吸附剂）和流动相（洗脱剂）。吸附剂的选择主要根据吸 附剂性质和分析要求通过实验来现在。 常用的吸附剂硅胶、氧化铝、活性炭、聚酰胺、纤维素等。 （3 ）吸附色谱洗脱剂 流动相的洗脱作用实质上是洗脱剂分子与样品组分竞争占据吸附剂表面活 性中心的过程。为了要使试样中吸附能力稍有差异的各种组分分离，应根据试样 的性质，吸附剂的活性，选择适当极性的洗脱剂。 化合物极性与其结构有关。按结构的特征，各种有机物的极性大小顺序为： 烷烃 烯烃 醚类 硝基化合物 酯类 酮类 醛类 胺类 醇类 酚类 酸类 常用溶剂的极性大小顺序为： 石油醚 环己烷 四氯化碳 苯 乙醚 乙酸乙酯 丙酮 乙醇 水 在进行吸附柱色谱分离时，应根据样品的性质、吸附剂的性能、流动相的极 性三方面的影响因素加于选择。一般的选择规律是：样品极性较大，在极性吸附 剂柱上进行分离，则应选用吸附性较弱（即活性较低）的吸附剂，用极性较大的 溶剂进行洗脱。组分的极性较弱，就应选用吸附性较强（即活性较高）的吸附剂， 用极性较小的溶剂进行洗脱。 2 、分配柱色谱法 （1）分离原理 分配色谱是利用各组分在两种互不混溶溶剂间的溶解度差异来达到分离的。 在分配柱色谱分离时，这两种互不混溶的溶剂之一是流动相；另一种是吸收在载 体或担体中的溶剂，例如，含有一定量水分的硅胶，其所含的水分可作为固定相。 当流动相带着试样中的各种组分通